B W 5147 淋 巴 瘤 细 胞 系(A T C C # TIB4 8 , 全 名 为 B W 5147.G .4.1,药物标记,在H A T 培养基中死亡,对 6-硫鸟嘌呤抵抗)小鼠来源的淋巴结T 细 胞 (单 元 2. n 和单元2. 12)。 3b. 对于同种反应性T 细胞:融 合 前 3d ,再次刺激来源于初次混合淋巴细胞反应体系 的同种反应性T 细 胞 (单 元 2. 12)。 4•融合前一天,用新鲜的D M E M -10完全培养基将B W 5147淋巴瘤细胞按1 : 5 比例传 代 (3 个 175c m 2 组织培养瓶,每 瓶 含 100ml I X l O 5〜2 X 105 个细胞/m l 以期在融合 当天收获> 1 X IO8 个细胞)。 5 . 准 备 2 X H A T 培养基、 D M E M -20完全培养基和含5 0 % P E G 溶 液 。用 50m l 离心管 分 装 2 X H A T 培养基和D M E M -20完 全 培 养 基 (每 种 3 管),用 4m l 离心管分装2ml P E G 溶液。 6 . 融合当天, 37°C 水浴预热以下容器和试剂: 分别装有 7 5m l 水 的 3 个 4 0 0m l 和 3 个 6 0 0m l 烧杯 ;" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/07/A1469511813999sbqjbxq44mpng_small.jpg" style="width: 472px; height: 679px;" />
辅助方案 1 筛选表达 C D 3-T C R 原始杂交瘤
在杂交瘤被转移到 2 4 孔 板 后 ,立 即 利 用 一 孔 进 行 初 筛(如 初 筛 C D 3-T C R 的表达)。被选择的细胞株应该通过有限稀释进行克隆和冻存(单 元 1 . 3 , 辅助方案)。
附 加 材 料
辅助方案 2 筛选抗原特异性的杂交瘤
在辅助方案 1 中,只有一部分 C D 3-T C R + 的杂交瘤具有所需的抗原特异性,因此,需要测试候选杂交瘤的抗原特异性,而 不 是 保 存(克隆及冻存)所 有 的 C D 3-T C R + 的杂交瘤。