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高效液相色谱-串联质谱法检测固醇类激素

标签：兴奋剂检测激素

高效液相色谱-串联质谱技术(LC-MS)是采用高效液相分离技术与质谱质量分析串联技术进行样品定性定量分析的手段。可以用于（1）不挥发或者极性化合物的成分分析；（2）生物大分子（包括蛋白，多肽，多聚物等）的分析测定；（3）对含量极低到匹克级的成分也可以进行准确的定量。

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3.6
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高效液相色谱-串联质谱法

实验方法原理	高效液相色谱-串联质谱法，即以高效液相色谱为分离手段，以质谱为鉴定和测定手段，通过适当接口将两者连接成完整仪器。试样通过液相色谱系统进样，由色谱柱分离，而后进入接口。在接口中，试样由液相中的离子或分子转变成气相离子，然后被聚焦于质量分析器中，根据质荷比而分离。最后离子信号被转变为电信号，由电子倍增器检测，检测信号被放大后传输至计算机数据处理系统。
实验材料	动物源性食品
试剂、试剂盒	标准品睾酮甲基睾酮黄体酮群勃龙
仪器、耗材	TSQ Quantum三重四极杆串联质谱仪电喷雾电离源 Surveyor AS自动进样器
实验步骤	1. 取样：称取约500 g动物肌肉、肝脏，完全切碎后，匀浆备用；取10枚鲜蛋，去壳，均质备用；取鲜牛奶500 mL，混匀备用。 2. 提取：试样5 g，置于50 mL离心管中，加入10 %碳酸钠溶液3 mL和10 mL乙酸乙酯，均质30 s，振荡10 min（4℃），6000 r/min离心10 min，将上层有机相转移至梨形瓶中。再用10 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上层有机相。在40℃下，旋转蒸发至干。用50 %乙腈水溶液1 mL溶解残余物，溶液冷冻30 min，16000 r/min离心5 min，取适量溶液经0.22μm滤膜过后，供LC/MS/MS法测定。 3. 进样分析
注意事项	1. 质谱仪的离子源、质量分析器和检测器都必须在高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生不必要的离子-分子反应。真空度不够则会导致灵敏度不够。 2. LC-MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含哪和钾的成分必须<1mmol/1，盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器。 3. 选择合适的电压：当DP电压（去簇电压）高时，样品在源内分解或碎裂，也会使得多电荷离子比例低，多聚体也减少。
其他	1. 离子源的选择对待测化合物的定性定量分析检测至关重要，一般来说，中等极性或大极性化合物多选择电喷雾离子源，而小极性化合物多选择大气压化学电离，小分子化合物也倾向于选择大气压化学电离，电喷雾有利于分析生物大分子或其他分子量大的化合物。 2. 正、负离子模式的选择：一般原则为正离子适合碱性样品，可用于乙酸或甲酸对样品加以酸化，样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。负离子适合酸性样品，可用氨水对样品进行碱化。 3.来源于《药物色谱分析》丁黎主编。