结合。也可用其它阴离子交换柱,如 Q Sepharose Fast Flow、Mono Q 等。预期,所有残留的 SKL 将结合于 POROS 50Q。由于有大量荷正电的残基,故也能与阳离子交换柱结合。因此,也可以用荷负电的离子交换柱如 POROS 50S,S-Sepharose Fast Flow 或 Mono S 来纯化σ32。但对σ32 的纯化,阳离子交换柱优于阴离子交换柱,因为残留的和从结合蛋白解离下来的 SKL 将穿柱而过,并不会结合于柱上。实际上,甚至有可能完全免除透析操作. 直接将稀释的蛋白质样品加载于 POROS 50S 柱即可。
3) 用缓冲液 A 洗涤层析用的介质,然后将其倾入带适配器接头的玻璃柱中,装成一总体积为 5 ml 的层析柱。用缓冲液 A+1 mol/L NaCl 洗柱,并用缓冲液 A 平衡柱子。