标签: 脑片 免疫组织化学 ABC法
了解免疫组织化学实验原理,熟练掌握实验操作步骤。(神经生物学实验讲义;杜继曾,陈学群主编;2004.09)
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1. 内源性生物活性及其消除生物素是一种辅酶,是在脱羧基酶、羧基转换酶等催化的代谢环节中所产生的羧基中间载体,在应用ABC法染色时会与抗生物素蛋白结合而产生非特异性染色。对含内源性生物素或生物素样物质较丰富的组织,在应用ABC法前,应预先以0.01%的抗生素蛋白和0.01%生物素溶液分别作用20分钟左右,以消除内源性生物素活性。每次作用后应用PBS洗5分钟,更换3次。
3. 标记过程中应始终保持组织切片的湿润。
4. 在DAB显示液中加入镍等金属离子,以使反应产物呈蓝黑色,并用甲基绿复染核,可加强阳性染色的对比度和提高灵敏度。
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