免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与ProteinA/G偶联的agarose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。
 

图1.IP原理及流程

 

在免疫沉淀实验后的WB验证环节中，当使用常规的 Anti-IgG (H+L) 酶标二抗时，通常会出现对应免疫沉淀一抗变性后产生的重链（50kDa）和轻链（25kDa）两条带。如果检测的目的蛋白分子量在此附近时，就会受到这两条带的干扰。
 

图2.传统二抗WB验证IP，重链轻链干扰

 

那么如何避免避免IP检测过程中的重、轻链干扰，达科为可为您提供两种解决方案：

方案一：WB抗体和IP抗体选择不同种属

 

 

方案二：选择只识别天然二硫键构象的二抗

Rockland TrueBlot^®二抗，是一系列单克隆二抗，与传统二抗不同的是，TrueBlot^®二抗只识别天然二硫键的IgG，而不识别被还原打开的二硫键，因此可以消除IP检测过程中变性抗体重链和轻链的影响。

图3.Rockland TrueBlot®二抗vs 传统二抗

 

TrueBlot^®系列产品注意事项

1. TrueBlot^®产品适用的前提：当IP抗体与WB一抗同源。

2. Rabbit TrueBlot^®不能与Protein A/G结合的Beads一起用。推荐TrueBlot^®配套的Beads。

3. 非IP验证的WB实验也可使用TrueBlot^®系列产品避免重链和轻链的影响。

促销活动

促销活动活动范围：Rockland全系列二抗（包括TrueBlot^®系列二抗）

活动内容：请咨询当地业务

活动时间：即日起到9.30日

活动代码：DIST-Q3CNSEC

 

Rockland热卖TrueBlot®产品列表

 

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