中国发现新型L1A/C RFLP 1-3-4型猪繁殖与呼吸综合征病毒，可致严重肠道感染

近期，天津农业大学和天津中医药大学联合在《Elsevier》发表了关于重组PRRSV变体，其具有L1A/C RFLP 1–3–4 模式的研究，并对其基因组进行了分析。

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由PRRS病毒引起的严重传染病，分为欧洲型和北美型两大基因型，其中PRRSV-2常用RFLP和谱系分类系统进行遗传多样性分析。谱系1（L1）在美国广泛流行，常见RFLP类型为1-3-4、1-4-4和1-7-4；而在中国，以1-4-4型L1C株系为主，但比例正逐年下降，1-3-4型虽报道较少，却具有独特的肠道定植特性，可能成为新的优势株，对养猪业造成严重威胁。

1. 天津养猪场腹泻仔猪中分离出L1型PRRSV

2024年5月至6月，天津三家养猪场的哺乳仔猪在出现严重腹泻后采集血清样本，经PAM细胞分离检测出L1型PRRSV阳性，且对多种常见猪病毒检测均为阴性。分离株表现典型细胞聚集和碎裂，经纯化命名为TJ2401、TJ2402和TJ2406，免疫荧光检测呈绿色荧光，三株病毒的TCID₅₀分别为1×10^6.34、1×10^6.25和3×10^5.0/0.1 mL。

图1. PRRSV毒株TJ2401、TJ2402和TJ2406的分离鉴定结果

（A-D）感染48小时后 （E-H）用抗N蛋白抗体标记，比例尺为100μm

结论：2024年5月至6月期间，天津地区哺乳仔猪严重腹泻样本中成功分离出L1型猪繁殖与感染综合征病毒（PRRSV），且经细胞病变效应和免疫荧光检测确认其高毒力特性。

2. 分离PRRSV L1型株的基因特征与亚型分析

TJ2401、TJ2402和TJ2406三个分离株全长基因测序显示NSP2存在与L1型（NADC30样）一致的缺失模式，全基因组系统发育分析显示它们与L1.8亚群关系密切，ORF5基因RFLP分析则将TJ2401归为L1A，TJ2402和TJ2406归为L1C亚型。

图2. TJ2401、TJ2402和TJ2406的NSP2序列及系统发育树

（A）TJ2401、TJ2402和TJ2406的NSP2缺失模式与NADC30相同

（B）三株与L1.8型（NADC30样）PRRSV关系密切

（C）TJ2401属L1A，TJ2402和TJ2406属L1C

结论：TJ2401、TJ2402和TJ2406三个分离株均为L1型（NADC30样）PRRSV，并分别属于L1A和L1C亚型。

3. 分离PRRSV株的重组特征及关键基因片段分析

重组分析显示，TJ2401、TJ2402和TJ2406均存在重组特征，其中TJ2401和TJ2402含有来自L8型（JXA1样）病毒的共同基因片段1-1970nt，可能与其相似的临床致病性相关，而TJ2406主要与NADC30毒株同源，并含有限定重组片段。

图3. 基于代表性PRRSV基因组构建的系统发育树

结论：三株PRRSV均为重组株，TJ2401和TJ2402共享L8型片段，可能导致临床致病性相似。

4. 三个分离株对仔猪的临床症状与病毒动力学分析

接种TJ2401、TJ2402或TJ2406的仔猪出现体温升高、严重腹泻和临床症状评分升高，日增重下降，并在第11天出现血清转化，血清及肛门拭子病毒载量显著升高，而对照组未出现相关症状或病毒检测阳性。

图4. 仔猪的临床指标及病毒学和免疫学检测结果

（A）接种TJ2401、TJ2402或TJ2406的仔猪均体温升高

（B）仔猪的日增重显著下降
（C）感染后第11天，仔猪血清PRRS抗体出现血清转换（阈值0.4）

（D）血清病毒载量在感染后5天升高，第11天达峰

（E）肛拭子中的病毒载量与血清病毒载量一致

（F）病毒在多组织中存在，以肠道最为明显

结论：TJ2401、TJ2402和TJ2406均能在仔猪中引起明显临床症状和病毒感染，对照组未见异常。

5. 分离PRRSV株对仔猪肺部及肠道病变的比较分析

三组仔猪在感染后第21天被人道处死以进行尸检。结果显示，感染TJ2401、TJ2402或TJ2406的仔猪均出现间质性肺炎，肺部实变和出血，病变评分显著高于未感染组。TJ2401和TJ2402感染组还表现出肠壁变薄、肠内容物稀水样及肠系膜淋巴结肿大，而TJ2406组未见明显肠道病变。显微镜检查显示，感染三株病毒的仔猪肺泡间隔增厚，肺部显微病变评分升高。肠道病理方面，TJ2401和TJ2402组出现肠上皮脱落和淋巴细胞浸润，TJ2406组和对照组未见明显病变。

图4. 显示肺部和肠道样本在肉眼和显微镜下的组织损伤情况

（A）TJ2401、TJ2402和TJ2406感染肺部病变明显，炎症细胞浸润显著

（B）TJ2401和TJ2402可引起肺部和肠道病变，未感染组未见明显损伤

结论：TJ2401和TJ2402可引起仔猪明显肺部和肠道病变，而TJ2406主要引起肺部病变，肠道未见明显异常。

本研究发现L1A TJ2401和L1C TJ2402可引起严重肠道感染，TJ2406仅致间质性肺炎，表明NADC30样PRRSV致病性复杂，疫苗防控效果有限，需要加强监测并及时调整防控策略。

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