细胞培养那点事——AML-12 小鼠肝细胞

AML-12 小鼠肝细胞

种属：小鼠

生长特性：贴壁，上皮细胞样

 

注意事项：

1. 本产品仅限用于科学研究，不可用于人和动物的活体诊断治疗。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作。

3. 充液培养基血清浓度为2%，请勿使用原瓶培养基培养，需更换新鲜培养基。

 

验收产品：

1. 请检查包装是否有破损或漏液情况。

2. 使用75%酒精喷洒消毒培养瓶后镜检细胞状态。

3. 如为冻存细胞，请立即放至-80℃超低温冰箱或液氮或立刻进行复苏培养操作。

 

培养条件：

AML-12 ： DMEM/F12+10% FBS（FBS-AS500）+1%ITS(胰岛素+转铁蛋白+硒)  +1% Dexamethasone  地塞米松+1%p/s

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

 

冻存条件：SERANA无血清细胞冻存液（WXQA100）

 

传代方式：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2           次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25%胰酶-EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.  将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传   代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

 （第一次消化时常取出于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化）

 

冻存方式：

细胞冻存步骤以SERANA无血清细胞冻存液为例：

1. 细胞冻存时，收集原培养基置于15mL离心管中，再往培养瓶加入2mL PBS，润洗后收集。

2. 加入1mL 0.25%胰酶-EDTA消化液，置于37°C孵育，细胞皱缩变圆开始脱落时终止消化，加入1mL完全培养基。

3. 将悬液轻轻吹匀后转移至15mL离心管，1000r/min离心5min。

4. 去上清，按大约1*10^6个细胞/mL加入预冷4℃的无血清冻存液。

5. 吹打均匀，每支冻存管冻存1mL细胞液，注意冻存管做好标识。

6. 将冻存管置于-80℃冰箱，过夜后转移至液氮中保存。

 

复苏细胞：

1. 将冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻。

2. 移至离心管，滴加3mL预热后培养基。

3. 1000r/min离心5min，去上清，加入1mL完全培养基。

4. 吹打成单细胞悬液，加入培养瓶。

5. 补足完全培养基至5mL，十字交叉法摇晃培养瓶使细胞分布均匀。

6. 置于37°C培养箱培养静置。