细胞培养那点事——STO 小鼠胚胎成纤维细胞

STO 小鼠胚胎成纤维细胞

种属：小鼠

生长特性：贴壁 成纤维细胞样

 

注意事项：

1. 本产品仅限用于科学研究，不可用于人和动物的活体诊断治疗。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作。

3. 充液培养基血清浓度为2%，请勿使用原瓶培养基培养，需更换新鲜培养基。

 

验收产品：

1. 请检查包装是否有破损或漏液情况。

2. 使用75%酒精喷洒消毒培养瓶后镜检细胞状态。

3. 如为冻存细胞，请立即放至-80℃超低温冰箱或液氮或立刻进行复苏培养操作。

 

培养条件：

     STO  ：  90%DMEM+10% FBS（FBS-AS500）

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

 

冻存条件：SERANA无血清细胞冻存液(WXQA100)

 

传代方式：

1. 细胞密度达70-80%以上，可以进行传代，传代比例为1:2到1:5。

2. 弃去原培养基，加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。

3. 加入1~2mL消化液，置于37°C孵育消化。

 （第一次消化时常取出于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化）

4. 消化好后加入3ml完全培养基，将悬液轻轻打匀后转移至15mL离心管。

5. 1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

 

冻存方式：

细胞冻存步骤以SERANA无血清细胞冻存液为例：

1. 细胞冻存时，弃去原培养基，加入2mL PBS，润洗后去除。

2. 加入1mL 0.25%胰酶-EDTA消化液，置于37°C孵育，细胞皱缩变圆开始脱落时终止消化，加入3mL完全培养基。

3. 将悬液轻轻吹匀后转移至15mL离心管，1200r/min离心3min。

4. 去上清，按大约1*10^6个细胞/mL加入预冷4℃的无血清冻存液。

5. 吹打均匀，每支冻存管冻存1mL细胞液，注意冻存管做好标识。

6. 将冻存管置于-80℃冰箱，过夜后转移至液氮中保存。

 

复苏细胞：

1. 将冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻。

2. 移至离心管，滴加3mL预热后培养基。

3. 1000r/min离心5min，去上清，加入1mL完全培养基。

4. 吹打成单细胞悬液，加入培养瓶。

5. 补足完全培养基至5mL，十字交叉法摇晃培养瓶使细胞分布均匀。

6. 置于37°C培养箱培养静置。