SERANA细胞库——over细胞培养说明书

over 细胞培养说明书

培养条件：10%FBS+90%MEM+1%p/s

 FBS推荐：SERANA品牌：FBS-TZT018 (AD级）或者FBS-AS500(C级)

细胞复苏
 
1. 准备工作：将恒温水浴锅预热至37℃左右，准备好适量的MEM培养基（含10%胎牛血清、1%双抗）、无菌离心管、细胞培养瓶等。
2. 解冻细胞：从液氮中取出Vero细胞冻存管，立即投入37℃水浴锅中，快速晃动使其在1分钟左右完全融化。
3. 离心重悬：将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入4mL培养基混合均匀，1000rpm离心4min，弃上清液，再加入1-2mL培养基轻轻吹打混匀。
4. 接种培养：将细胞悬液加入到含有适量培养基的培养瓶中，放入37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜，第二天换液并观察细胞密度 。
 
细胞传代
 
1. 观察细胞状态：当细胞生长至汇合率达到80%-90%时进行传代。
2. 消化细胞：吸弃培养瓶内的培养基，用PBS润洗细胞1-2次，加入适量胰蛋白酶溶液，在37℃培养箱中消化，每隔10秒左右轻轻晃动培养瓶，直到观察到有流沙状细胞滑动，或一分钟后倒置培养瓶，将有细胞的面朝上，然后轻轻拍打，使细胞脱落。
3. 接种新瓶：加入培养基终止消化，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，将细胞团吹散成单个细胞，按1:3至1:5的比例将细胞悬液分到新的细胞培养瓶中，补足培养基，放入培养箱中继续培养。
 
细胞冻存
 
1. 选择冻存时机：在细胞对数生长期进行冻存。
2. 消化收集：同传代操作中的消化步骤，消化后加入培养基终止消化，将细胞悬液转移至无菌离心管中，1000rpm离心4min，弃上清液，用PBS清洗一遍，弃掉PBS后进行细胞计数。
3. 配置冻存液：使用无血清细胞冻存液(serana ：WXQA100)
4. 冻存细胞：根据细胞数量加入适量冻存液重悬细胞，使细胞密度在5×10⁶-1×10⁷/mL之间，将细胞悬液分装进细胞冻存管，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，做好标识，先放入-80℃冰箱中24h，之后转入液氮罐中长期储存 。