SERANA细胞库——293T细胞培养说明书

293T细胞

培养条件：SERANA 品牌：FBS-TZT018(AD级） 或 FBS-AS500 （C级）

                FBS +90%DMEM+1%P/S

细胞复苏
 
1. 准备工作：提前将水浴锅温度设置为37℃至40℃，准备好含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基、细胞培养瓶等。
2. 取出冻存细胞：从液氮中迅速取出冻存的293T细胞，立即投入37℃至40℃水浴锅中，快速晃动，使其在1至2分钟内完全溶解。
3. 接种培养：将细胞悬液转移至含有适量培养基的细胞培养瓶中，轻轻混匀，放入37℃、5%CO₂培养箱中培养。
 
细胞传代
 
1. 观察细胞状态：当细胞生长至汇合率达到80%至90%时进行传代。
2. 吸弃培养基：轻轻吸取培养瓶内的原有培养基，注意不要用力摇晃培养瓶，以免细胞脱落。
3. PBS润洗：加入适量常温PBS，轻轻润洗细胞10至20秒后舍弃PBS。
4. 消化细胞：加入适量0.05%胰蛋白酶-EDTA，轻轻晃动培养瓶使胰酶与细胞充分混匀，消化15至30秒左右，当细胞间隙变大，但并未完全脱落时，加入培养基终止消化。
5. 吹散细胞：用移液枪轻轻吹打细胞悬液，将细胞团吹散成单个细胞。
6. 离心收集：将细胞悬液转移至离心管中，900rpm离心3至5分钟，舍弃上清液。
7. 接种新瓶：加入新的培养基重悬细胞，并均匀分到新的细胞培养瓶中，静置培养。
 
细胞冻存
 
1. 选择冻存时机：在细胞对数生长期进行冻存，以增加细胞复苏成活率。
2. 消化细胞：同传代操作中的消化步骤，消化后加入培养基终止消化，吹打混匀制成细胞悬液。
3. 细胞计数：取适量细胞悬液进行细胞计数。
4. 配置冻存液：推荐使用SERANA无血清细胞冻存液（货号：WXQA100）
5. 重悬细胞：将细胞离心，1000rpm，2分钟，根据计数结果加入细胞冻存液重悬细胞，密度为3×10⁶个/ml 。
6. 冻存细胞：将细胞重悬液分装进细胞冻存管，进行冻存，先放入-80℃冰箱过夜，第二天转移至液氮中长期保存。