血清使用常见问题及应对方法

你需要知道的血清使用常见问题及应对方法

 

1.如何解冻血清才不会使产品质量受损

 

将血清从低温冰箱取出后，先于2-8℃冰箱放置12-24小时使之部分溶解，然后在室温下使之全溶；但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。切勿将刚刚从-20℃冰箱里拿出来的血清直接放在水浴中，无论室温的水或者37℃的水;因为在水浴中血清迅速融化，过大的温差变(-20℃→37℃，温差为57℃)极其容易造成血清析出沉淀。从低温冰箱取出血清直接置于56℃水浴中更是极其残忍的做法，是对血清的不负责任，对科学规则的无情践踏!

血清应该置于-15℃以下保存；若一次无法用完一瓶，应该无菌分装，再冷冻保存，避免反复冻融。

 

2.血清中可能出现的沉淀物是什么？

 

纤维蛋白：它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。

磷酸钙：它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。

胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质：它们也是血清中出现沉淀物的常见原因。

关于细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养。

 

3.为什么要热灭活血清?有必要热灭活吗?

 

加热可以灭活血清中的补体系统，使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨细胞，同时还能够参与溶解细胞的过程。

诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活:而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中，推荐使用热灭活血清。实验显示，经正确热灭活处理的血清，对细胞的生长只有做小的促进或完全没有促进作用，而通常因为高温处理影响了血洁的质量，造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清，沉淀物明显增多，倒置显微镜下观察呈“小黑点”，往往会使研究者误以为是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又会更增多，又会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此，我们建议，若非必须，可以不进行热处理，既节省时间又确保质量。

 

4.如何避免沉淀物的产生？

温度过高、时间过么、摇晃不均匀等，都会造成沉淀增多;我们建议，如非必要，无须对血清进行灭活:若必须热灭活，应严格遵守56℃℃、30min 的原则，并随时摇晃均匀。

 

5.保存血清的方法是什么？

需长期保存的血清必须储存于-15℃或者更低温冰箱中，研究表明，储存在-80℃下的血清在性能方面没有任何变化，但解冻时巨大的温差会导致更多沉淀的产生，故不建议-80℃储存。血清在2-8℃冰箱存放时间请勿超过1个月；若一次无法用完1瓶，建议分装后保存，避免反复冻融。另外，血清结冰体积会增加约10%，分装时请预留一定的体积空问。