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Fluo 4-AM;钙荧光探针
发布时间：2023-07-27 09:02 | 点击次数：
Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换
成了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10nm左右。这
个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比
Fluo-3强一倍。
Fluo-4,AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被
滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与
细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波
长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的
变化。
1试剂
1试剂
2mM的Fluo-4,AM/DMSO（将1mgFluo-4,AM溶于442µLDMSO）
PluronicF127
Hanks•balancedsaltsolution（HBSS）
HEPESbuffersaline（10mMHEPES，1mMNa2HPO4，137mMNaCl，5mMKCl，
1mMCaCl2，0.5mMMgCl2，5mMglucose，0.1%BSA，pH7.4）
2操作
①.向Fluo-4,AM/DMSO溶液中加入16.5mgPluronicF127，PluronicF127可以
防止Fluo-4,AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
②.用HBSS稀释Fluo-4,AM溶液，制备4µM的Fluo-4,AM工作液。
③.将Fluo-4,AM工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。
④.加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
⑤.用HEPESbuffersaline洗涤细胞3次，然后用HEPESbuffersaline使细胞重
悬浮，制成1×105cells/mL的溶液。
⑥.37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长494nm，
发射波长516nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅
供参考。
储存条件：-20℃干燥避光保存，
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