亮氨酸氨基肽酶（Leucine Aminopeptidase, LAP）试剂盒说明书 微量法 100 管/96 样

亮氨酸氨基肽酶（Leucine Aminopeptidase, LAP）试剂盒说明书

                                                      微量法 100 管/96 样

 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

LAP 是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，广泛存在于肝、肾、胰等组织中，尤其以肝脏中含量最为丰富。各类肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP 的活性均有不同程度的升高，因此，血清 LAP 活性的检测能从不同侧面反映各种肝病的发生和发展。

测定原理：

LAP 分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP 活性。

自备仪器和用品：酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样品的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 1000~5000：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

LAP 测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二转移至试剂一中充分溶解（如较难溶解，可 50℃水浴加热约 30min 促进溶解）；在 37℃

（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 50μl 样本和 150μl 试剂一，混匀后立即记录 405nm 处初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

注意事项：若ΔA 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。使 A2-A1 小于

0.5，可提高检测灵敏度。

下载文件详细