氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒说明书分光光度法 50 管/48 样

 

氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒说明书分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

测定原理：

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在 570 nm 有特征吸收峰；通过测定 570 nm吸光度，来计算氨基酸含量。

 自备仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1ml 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。

样品中 AA 提取：

1、按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行室温匀浆，然后转移到 1.5 ml EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15 min；自来水冷却后，8000g，4℃离心 10min，上清液置冰上待测。

2、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清等液体：直接检测。

测定步骤：

1.       分光光度计预热 30 min，调节波长到 570 nm，蒸馏水调零。

2.    空白管：取EP 管，加入 50μl 蒸馏水，500μl 试剂二，500μl 试剂三和 50μl 试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 15 min，冷却后反复颠倒EP 管数次，于 570nm 测定吸光值，记为A 空白管。显色后务必在 30min 内测完。

3.    标准管：取EP 管，加入 50μl 标准品，500μl 试剂二，500μl 试剂三和 50μl 试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 15 min，冷却后反复颠倒EP 管数次，于 570nm 测定吸光值，记为A 标准管。显色后务必在 30min 内测完。

4.    测定管：取EP 管，加入 50μl 上清液，500μl 试剂二，500μl 试剂三和 50μl 试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 15 min，冷却后反复颠倒EP 管数次，于 570nm 测定吸光值，记为A 测定管。显色后务必在 30min 内测完。

注意：空白管和标准管只需要测定一次。

氨基酸含量计算公式：

（1）  按照样本质量计算

氨基酸含量（μmol /g 鲜重）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×（V样总÷V 样）÷W=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷W

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