K7M2wt+luc小鼠骨肉瘤成骨细胞：操作宝典与应用全景

一、细胞介绍

K7M2wt+luc 是一种稳定表达荧光素酶(luciferase, luc) 的小鼠骨肉瘤成骨细胞系，源自高转移性K7M2细胞。其核心优势在于：

• 生物发光标记：可通过活体成像技术实时追踪肿瘤生长、转移及药物反应；

• 成骨特性保留：具备成骨细胞分化潜能，是骨肿瘤生物学研究的理想模型；

• 高侵袭性：模拟临床骨肉瘤的恶性行为，适用于转移机制研究。

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二、标准化操作流程

1. 复苏流程

材料：37°C水浴、预温培养基(DMEM+10% FBS+1% P/S)、离心管、培养瓶
步骤：
① 从液氮中取出冻存管，迅速置于37°C水浴，轻摇至完全融化（<1分钟）；
② 酒精擦拭冻存管，转移细胞悬液至含5ml培养基的离心管；
③ 1000 rpm离心5分钟，弃上清；
④ 用新鲜培养基重悬细胞，接种于培养瓶（推荐密度：5×10⁴ cells/cm²）；
⑤ 37°C、5% CO₂培养箱静置培养，24小时后更换培养基。

关键提示：快速融化避免冰晶损伤，首次换液去除残留DMSO。

2. 消化传代

材料：PBS、0.25%胰酶-EDTA、含血清培养基
步骤：
① 弃旧培养基，PBS轻柔冲洗1次；
② 加入胰酶（覆盖瓶底），37°C消化1-2分钟；
③ 显微镜下观察细胞变圆时，加入等体积含血清培养基终止消化；
④ 吹打均匀后离心（1000 rpm, 5min），按1:3~1:5比例传代。

优化点：过度消化会损伤细胞，建议使用含EDTA的胰酶提高效率。

3. 培养条件

• 培养基：DMEM高糖 + 10%胎牛血清(FBS) + 1%青霉素/链霉素

• 环境：37°C、5% CO₂、饱和湿度

• 换液频率：每2-3天换液，密度达80-90%时传代

• 注意事项：
  ✔ 血清批次需预先测试，确保细胞生长稳定
  ✔ 避免频繁扰动，减少自发分化

4. 冻存与保藏

冻存液配方：90%完全培养基 + 10% DMSO
步骤：
① 消化收集对数期细胞，离心后重悬于冻存液（密度：5×10⁶~1×10⁷ cells/ml）；
② 分装至冻存管，标注细胞名称、代次、日期；
③ 程序降温：4°C 30min → -20°C 2h → -80°C过夜 → 转移至液氮。
保藏要求：液氮气相长期保存，定期检查液氮水平。

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三、核心应用场景

1. 骨肉瘤转移机制研究：利用高转移特性解析侵袭相关基因；

2. 抗肿瘤药物筛选：结合活体成像量化药物疗效（如：多柔比星、顺铂）；

3. 体内外成像技术开发：优化生物发光检测灵敏度；

4. 肿瘤微环境互作：研究成骨细胞与免疫细胞、血管的交互作用；

5. 转移靶向治疗：验证新型靶向递药系统效果。

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四、关键注意事项表

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结语

K7M2wt+luc细胞将光学可视性与骨肉瘤生物学特性完美结合，为肿瘤研究提供动态追踪平台。严格规范的操作流程（从复苏到冻存）是保证实验可重复性的基石。智立中特生物将持续优化细胞培养体系，为您的肿瘤学研究提供高稳定性细胞资源与技术保障！