解密pBAD/His/LacZ：从高效提取到创新应用的完整指南

一、pBAD/His/LacZ表达系统核心解析
智立中特（武汉）生物科技有限公司在重组蛋白表达领域深耕多年，pBAD/His/LacZ作为我们重点优化的阿拉伯糖诱导型原核表达载体，具有以下技术优势：

• 精准调控：pBAD启动子实现0.0002%-0.2%阿拉伯糖梯度浓度调控

• 三重标签：His6标签（镍柱纯化）、LacZα肽段（蓝白筛选）、Xpress表位（Western验证）

• 多克隆位点：NotI/EcoRI/KpnI/XbaI/SacI多酶切位点实现灵活插入

二、提取培养全流程关键步骤

1. 工程菌构建
   采用热激法转化TOP10/PRO感受态细胞，在含100μg/mL氨苄青霉素的LB平板上进行蓝白斑筛选（X-gal终浓度40μg/mL）

2. 诱导表达优化

• 初始培养：37℃震荡培养至OD600=0.6（建议使用TSB培养基提高菌体密度）

• 梯度诱导：添加0.002%-0.2% L-阿拉伯糖，28℃诱导6-8小时

• 裂解缓冲液：推荐使用含1mg/mL溶菌酶、0.1% Triton X-114的Tris-HCl体系

3. 蛋白纯化工艺
   IMAC镍柱纯化时采用分步洗脱策略：

• 20mM咪唑去除杂蛋白

• 250mM咪唑洗脱目标蛋白

• 脱盐柱更换为PBS缓冲液（含10%甘油冻存）

三、常见技术难点及解决方案

四、创新应用场景拓展

1. 动态代谢调控：与我们的CRISPRi系统联用实现双通道调控

2. 膜蛋白研究：配套提供Mistic肽段融合表达服务

3. 诊断试剂开发：基于LacZ的β-半乳糖苷酶报告系统灵敏度达0.1pg/mL

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