EHS小鼠软骨肉瘤细胞培养指南

一、细胞特性与培养前准备

1. 细胞来源：EHS（Engelbreth-Holm-Swarm）小鼠软骨肉瘤细胞，是一种常用于肿瘤生物学研究的细胞系，可分泌丰富的细胞外基质（如层粘连蛋白、胶原）。

2. 培养条件：

   • 培养基：DMEM（高糖）或RPMI-1640，含10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素。

   • 环境：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱。

   • 基质建议：部分实验需提前用Matrigel或胶原包被培养器皿，模拟体内微环境。

二、培养步骤

1. 复苏细胞

   • 快速解冻冻存管（37℃水浴），离心（1000 rpm, 5分钟）去除冻存液。

   • 重悬于预温培养基，接种于T25培养瓶，初期密度建议5×10⁴ cells/cm²。

2. 换液与传代

   • 换液频率：每2-3天更换一次培养基，避免代谢废物积累。

   • 传代时机：细胞融合度达80%-90%时，用0.25%胰蛋白酶（含EDTA）消化1-2分钟，镜下观察细胞变圆后终止消化。

   • 传代比例：按1:2至1:3分瓶，避免过度稀释影响增殖。

3. 冻存

   • 对数生长期细胞用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）悬浮，分装至冻存管，程序降温后液氮保存。

三、关键注意事项

1. 污染控制：

   • 严格无菌操作，定期检测支原体。

   • 建议使用双抗（青霉素-链霉素）预防细菌污染。

2. 形态监测：

   • 正常EHS细胞呈梭形或星形，若出现空泡化或聚集，可能为状态不佳。

3. 功能验证：

   • 建议定期通过qPCR（检测Aggrecan、Collagen II表达）或阿尔新蓝染色验证软骨肉瘤特性。

四、常见问题解决

• 生长缓慢：检查血清批次活性或增加FBS浓度至15%。

• 消化困难：延长胰酶作用时间或预铺胶原增强贴壁性。