慢病毒稳转细胞系构建技术方案

一、服务概述

       智立中特（武汉）生物科技有限公司提供专业化的慢病毒载体构建、病毒包装及稳转细胞系筛选服务，适用于基因功能研究、蛋白表达、药物靶点筛选等领域。

二、技术流程

1. 目的基因克隆

   • 客户提供基因序列或由我司合成优化

   • 载体选择：pLVX-IRES-Puro/PCDH-CMV-MCS-EF1-GFP等

2. 慢病毒载体构建

   • 限制性内切酶/同源重组克隆

   • 载体测序验证（提供完整测序报告）

3. 病毒包装

   • 三质粒系统共转染293T细胞（psPAX2/pMD2.G）

   • 超速离心法浓缩病毒（滴度可达1×10⁸ TU/mL）

4. 细胞感染与筛选

   • 优化MOI值（预实验确定）

   • 嘌呤霉素/荧光分选（持续筛选2-4周）

5. 稳转株验证

   • qPCR检测基因组整合

   • Western blot检测蛋白表达

   • 功能验证（根据基因特性设计）

三、交付内容

• 构建好的慢病毒载体质粒

• 病毒原液及滴度检测报告

• 稳转细胞株及培养手册

• 完整实验报告（含电泳图、测序结果、荧光照片等）

四、项目周期

阶段	时间
载体构建	2-3周
病毒包装	1-2周
稳转株建立	3-4周

五、质量控制

• 全程无菌操作（生物安全二级实验室）

• 支原体/STR鉴定服务可选

• 提供3个月免费售后技术支持