解决了这几个问题，培养细胞有手就能贴壁

　　细胞培养中的细胞不贴壁（或不附着）是一个常见问题，可能由多种因素导致。贴壁细胞若长时间不贴壁，细胞形态会发生一定的退化继而导致细胞无法正常生长、繁殖，而直接进入衰退期。

　　这一问题在细胞生物学研究和生物医药生产尤其值得重视，因为细胞的附着是它们正常生长和分化的前提。以下是一些可能导致细胞不贴壁的原因。

　　1.培养基条件不适

　　pH值不适当：细胞生长的理想pH值范围一般在7.0到7.4之间，pH值过高或过低都可能影响细胞贴壁，严重时甚至导致细胞死亡。

　　培养基配方不适合：细胞类型不同，所需的营养成分和因子也不同，不合适的培养基可能无法提供细胞贴壁所需的条件。

　　解决方案：在处理细胞前，需详细阅读该细胞的使用说明，并针对不同的细胞使用其专用培养基。若实验室自配培养基，则需在培养基过滤分装前对其pH进行测定和调整，以保证它的pH在7.0-7.4之间。

　　2.细胞状态问题

　　细胞自身状态不佳：若细胞在传代过程中受损，或是在冻存和复苏过程中受到影响，就可能导致细胞活力下降，无法正常附着。

　　细胞老化：长期培养的细胞可能进入老化状态，失去贴壁能力。

　　解决方案：在处理细胞前，应先将其置于显微镜下观察状态。若细胞自身状态不佳，例如老化、形态异常、细胞数量过少等，应对其状态进行调整好后再进行下一步操作。另在细胞的冻存和复苏应采取“慢冻快复”的方式，以减少细胞的机械损伤和受冻存液DMSO的毒性影响。

　　3.培养容器问题

　　容器表面处理不当：细胞培养容器（如培养皿、瓶）表面未经过适当处理（例如胶原蛋白或纤维连接蛋白涂层），或处理不均匀，会影响细胞的附着。

　　解决方案：购买细胞培养容器时（如培养皿、瓶）需看清其产品类型和使用范围，对未曾使用过的品牌耗材，可先进行测试后再选用。

　　4.实验者操作不当

　　胰蛋白酶消化过度：胰蛋白酶用于使细胞从培养表面脱落，但如果消化时间过长或浓度过高，会损伤细胞膜，影响后续贴壁。

　　操作过程中的机械损伤：在细胞传代或接种过程中，过度的吸吐或剧烈的震荡可能会损伤细胞，导致其无法附着。

　　接种密度不当：细胞密度过高或过低都不利于贴壁，过高可能导致竞争营养和空间，过低则缺乏必要的细胞间相互作用。

　　解决方案：细胞传代时，胰酶的消化时间不宜过久，应每隔一分钟对细胞进行观察，轻轻晃动培养瓶，看细胞是否脱落，待绝大多数细胞能够脱落时，添加培养基终止其消化。细胞操作过程中应轻拿轻放，以减少其机械损伤。细胞的接种密度大于90%时，需对其进行传代处理，密度较低时应减少细胞的移动频率，对于生长较慢的细胞采取及时换液观察的方式培养即可。

　　5.污染

　　支原体污染：支原体是一种常见的细胞培养污染源，能够影响细胞的生长状态和贴壁性能。

　　容器污染：培养容器内受微生物污染或化学污染也可能影响细胞的贴壁。

　　解决方案：对使用的培养基、血清、胰酶，可先进行检测，确认无支原体污染后再使用。对于细胞库中的细胞，需定期对其进行细菌、真菌和其他污染物的检查，并及时清理受污染的细胞。同时在细胞的操作过程中，需做到规范操作，勤消毒，减少污染情况的发生。

　　6.其它因素

　　培养环境：温度、湿度、CO2浓度等环境因素也会影响细胞的生长状态。细胞在培养箱中孵育时，特别是在CO2培养箱中培养时，不恰当的CO2浓度会影响培养基的pH值，进而影响细胞的贴壁附着。

　　细胞株特性：某些细胞株可能本身就具有不贴壁的特性，如悬浮生长的细胞系

　　解决方案：在处理细胞前，需详细阅读该细胞的使用说明，了解其细胞贴壁类型、生长特性和传代方式。在培养过程中，每天观察培养箱情况，出现异常需将细胞及时移入功能完好的培养箱中。