鼠李糖乳杆菌培养注意事项及使用说明

鼠李糖乳杆菌是肠道正常的菌群之一，它是一种定植菌，由于它的定植作用可以抑制有害菌的生长，从而促进有益菌生长，比如促进双歧杆菌的作用和生长，从而调节肠道正常的菌群环境，可以抑制疾病的发生，可以有助于预防和治疗急慢性腹泻，尤其是对老年人抗生素相关性腹泻更有帮助。同时鼠李糖乳杆菌还有增加机体免疫力的作用，对于缓解过敏也有一定的帮助，比如增加了机体的免疫力，对湿疹的缓解也有一定的帮助。但是鼠李糖乳杆菌增加机体免疫力、缓解过敏和湿疹都只是辅助的作用，而并不是根本的治疗作用。
一、鼠李糖乳酪杆菌菌种介绍

拉丁名称：Lacticaseibacillus rhamnosus

曾用名：鼠李糖乳杆菌

模式菌株： 否

来源历史：←上海工业试验所←美国

收藏时间：1953-01-01

特征特性：G+，菌体短杆状，圆端，单个或成对排列，无芽胞。菌落圆形，表面凸起，边缘整齐，乳白色，不透明。发酵葡萄糖、果糖、乳糖、阿拉伯糖，微弱发酵木糖。接触酶阴性，从精氨酸产氨，从葡萄糖酸盐产酸，兼性厌氧。15℃生长，45℃不生长。

参考用途：乳酸发酵，GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》阳性对照菌株。

生物危害程度：四类

致病对象：无

培养条件

培养基：MRS培养基

酪蛋白胨 (胰酶消化) 10.0 g 

牛肉浸粉 10.0 g 

酵母浸粉 5.0 g 

葡萄糖      20.0 g 

吐温 80 1.0 g 

乙酸钠 5.0 g 

柠檬酸三铵  2.0 g 

K2HPO4 2.0 g 

MgSO4·7H2O   0.2 g 

MnSO4·H2O 0.05 g 

琼脂 15.0 g 

蒸馏水      1000.0 mL 

pH 6.2～6.5 

分离乳酸菌可添加CaCO3 20.0g。以上成分121℃，灭菌15 min。液体培养基不加琼脂。推荐使用成品培养基。

培养温度：28 ~30 ℃

需氧类型：好氧
二、注意事项
1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。
3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。
4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。
三、使用说明书
1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。
4、冻干管打开后需一次用完，不能留存。
5、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。
6、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。7、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理。8、甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。