木质素过氧化物酶(Lip)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定。
微信 13321108309
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：液体80mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体5mL×1 瓶，4℃保存。
产品说明：
木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。
操作步骤：
一、酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（10 ⁴ 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；
然后4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
二、测定操作

	测定管
试剂一（mL）	0.6
试剂二（mL）	0.2
样品（mL）	0.1
试剂三（mL）	0.1
充分混匀，于1mL 石英比色皿，蒸馏水调零，测定310nm 处10s 和310s吸光值，记为A1 和A2，△A=A2- A1

三、酶活计算公式
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min /mg prot）= △A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 215×△ A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min /g）= △A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 215×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每10 ⁴ 个细胞每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min /10 ⁴ cell）= △A ÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
                           = 215×△ A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min /L）= △A ÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 2.15×10 5 ×△ A
ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度， mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。