狂犬病病毒抗原检测试剂盒(酶联免疫法)说明书

【产品名称】 
通用名：狂犬病病毒抗原检测试剂盒(酶联免疫法) 
【包装规格】96人份/盒。 
【预期用途】 
本试剂盒用于测定狂犬病疫苗中G蛋白的相对含量。 
【检验原理】 
本试剂盒使用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验原理。微孔条上包被的狂犬病病毒抗体，可捕获样品中的狂犬病病毒G蛋
白，加入HRP 标记的狂犬病病毒抗体后，将形成“包被抗体-抗原-酶标抗体”复合物。加入显色剂，复合物上连接的HRP 
使显色剂生成蓝色产物，终止后变为黄色，通过酶标仪检测吸光度（A值），用标准品浓度值与A值拟合双对数曲线，计算
样品中狂犬病病毒G蛋白的相对含量。 
【主要组成成分】 
组成成分 
96T 
组成成分 
1.酶标板 
96T 
8×12 或12×8 孔 
5.显色剂B液 
2.酶标试剂 12ml×1 瓶 6.终止液 6ml×1瓶 
3.浓缩洗涤液（20×） 50ml×1 瓶 7.自封袋 1 个 
4.显色剂A液 
6ml×1瓶 
6ml×1瓶 
8.封板膜 
2张 
各组份主要组成：酶标板：包被有狂犬病病毒抗体；酶标试剂：含辣根过氧化物酶标记的狂犬病病毒抗体；浓缩洗涤液：
含不低于2.5%的表面活性剂；显色剂A 液：含过氧化物不低于0.3g/L；显色剂B 液：含TMB 不低于0.2g/L；终止液：含
不高于2mol/L 的硫酸。标准品需用户自备。 
注：封板膜不能重复使用，不同批次酶标板、酶标试剂不可混用，不能与其它厂家试剂混用。标准品可采用WHO标准品
或NIFDC标准品，如采用用户单位生产的狂犬病疫苗作为标准品，需经过至少三次NIH检测确定含量结果。 
【储存条件及有效期】 
试剂盒于2～8℃保存，有效期为12 个月。 
使用前请将试剂盒平衡至室温（约30 分钟）。未用完的微孔板条须与干燥剂一起用自封袋密封2～8℃保存。实验前将液
体试剂轻轻振荡混匀，使用后立即密闭放回2～8℃保存。 
生产日期、失效日期见标签。 
【适用仪器】加样器、温箱、洗板机、含波长450nm 的酶标仪。 
【样本要求】 
1、本试剂可使用狂犬病疫苗成品，及其制备过程中的中间品，其他样品不可用于本实验。 
2、样品中应无微生物，可使用0.02M PH7.4 PB对样品进行稀释，起始稀释比例建议1:5，根据样品浓度选择合适的稀释梯
度，稀释后样品不可留存应尽快使用。 
3、使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。 
【检验方法】 
1. 平衡：将试剂盒平衡至室温（约30分钟）。 
2. 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 
3. 稀释：按需求对标准品及待测样品进行稀释。如采用WHO标准品作为标准曲线，建议起始浓度为0.05IU/mL，梯度稀
释至少共4个浓度。 
4. 加样：分别在相应孔中加入待测样品、标准品等各100 µl。每板应设1孔空白对照(用双波长检测，可不设空白对照
孔)。 
5. 温育：用封板膜封板后，置37℃温育30分钟。 
6. 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 
7. 加酶：每孔加入酶标试剂100 µl，空白孔除外。 
8. 温育：操作同5。 
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9. 洗板：操作同6。 
10. 显色：每孔加入显色剂A、B液各50 µl，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟。 
11. 测定：每孔加终止液50 µl，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450 nm处(建议用双波长450 
nm/600~650 nm 检测)，用空白孔调零点后测定各孔A值。 
【检验结果的解释】 
1. 以标准品的抗原含量及其对应的吸光度A值做双对数曲线，求出线性回归方程，将待测样品吸光度的对数值代入回归方
程，求得相应样品中抗原含量。 
2. 各值取自然对数为例：以校准品抗原含量自然对数值（LN值）为自变量（X），以其对应的吸光度自然对数值（LN值）
为因变量（Y），求出线性回归方程，将待测样品的吸光值计算其LN值，代入方程计算出抗原含量。 
3. 待测样品A值建议控制在0.1-2.0范围内，如不在此范围内建议调整稀释比例。待检样品的检测值需在标准曲线范围内，
超出此范围时，无法准确定量。 
4. 若实验结果出现以下任何情况均视为无效，需要重复实验： 
① r＜0.99 ② WHO标准品0.05 IU/ml A值＜1.0 ③空白孔A值＞0.1。 
【注意事项】 
1. 本品仅供研究使用，操作应按说明书严格进行。使用者需经过专业培训，实验操作前必须戴手套，穿工作衣。 
2. 封板膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂不可混用，不能与其它厂家试剂混用。 
3. 避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84 消毒液）的环境下操作。 
4. 使用前请将试剂平衡至室温（平衡30 分钟），实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8℃。未用完的微孔板
条与干燥剂一起用自封袋密封2～8℃保存。过期试剂请勿使用，同时应避免微生物污染。 
5. 加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器吸头和加样槽，以
防出现交叉污染。 
6. 洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30～60 秒浸泡时间。在洗板结束后，必须
立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。 
7. 结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印
或划痕都可能影响板孔的读值。 
8. 实验所用的关键仪器设备应定期校准与维护。 
【基本信息】 
生产企业名称：北京云菱生物技术有限公司 
住所：北京经济技术开发区建安街甲2号 
联系方式：010-57047851 
售后服务单位名称：北京云菱生物技术有限公司 
联系方式：010-57047702 
本试剂仅供科研使用 
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