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细胞培养常见问题及解决(六)

251 人阅读发布时间:2023-09-04 14:05

50. 为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,
激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养 ES 细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
51. 有必要做热灭活吗?
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞
的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细
胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下
观察,像是小黑点,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在 37℃环境中,又会使此
沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
52. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?
有些胎牛血清产品没有预老化,储存在 28℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋
白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20
储存胎牛血清,避免反复冻融。53. 如何避免沉淀物的产生?
我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:
(1)解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至 4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(
-20℃至 37),非常容易产生沉淀物。
(2)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(3)请勿将血清置于 37℃太久。若在 37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成
分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
(4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(5)若必须做血清的热灭活,请遵守 56℃,30 分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久
或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
资料格式:

细胞培养常见问题及其解决.pdf

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