BCA蛋白浓度测定试剂盒使用手册

BCA蛋白浓度测定试剂盒使用手册

产品简介：

BCA蛋白浓度测定试剂盒（BCA Protein Concentration Assay Kit）是根据最常用的BCA蛋白浓度检测法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单化，稳定性高，灵敏度高和兼容性好。最小检测浓度达到25μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5μg，样品体积为1-20μL。在25-1500μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。

BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，TritonX-100，Tween20等。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。

使用方法：

一、稀释BSA标准品

1. 配制5mg/mL BSA蛋白标准液：取BSA标准品1管（5mg），加入1mL BSA稀释液，涡旋充分溶解，溶解后置于冰上放置，使用后-20℃保存。

2. 配制0.5mg/mL BSA工作液：取50μL 5mg/mL蛋白标准液，加入450μL BSA稀释液，混匀即得到终浓度为0.5mg/mL的BSA蛋白工作液，溶解后置于冰上放置，使用后-20℃保存。

二、BCA工作液配制

3.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5mL BCA试剂A加100μL BCA试剂B，混匀，配制成5.1mL BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。

三、蛋白浓度测定

4.将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μL加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20μL，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL。

5.加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20μL，需加标准品稀释液补足到20μL。注意：如果样本蛋白浓度过高可进行适当稀释。

6.各孔加入200μL BCA工作液，37℃放置20-30分钟。注:室温放置2小时或60℃放置30分钟也可。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

7.测定A562或540-595nm之间的吸光度。

8.根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。

注意事项：

1.需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

2.建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

3.测定标准曲线时如发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。

4.如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请选用我公司的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(GP0027)。

5.为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

6.EDTA浓度必须小于10mM，不兼容EGTA。

7.不适用BCA法时，请选用我公司的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(GP0027)。

8.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

9.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。