- 移动端
北京德航五洲科技有限公司
6 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0
- 0
- 2
- 2
推荐产品
技术资料/正文
植物基因组 DNA 提取及其检测
4365 人阅读发布时间：2024-02-21 11:40
一、背景知识
在分析和研究 DNA 时，提取和纯化 DNA 是第一步操作，也是实验的基础。对于植物来说，DNA 主要存在于细胞核内，核内 DNA 占整个细胞 DNA 量的 90% 以上；核外的 DNA 主要有线粒体 DNA 和叶绿体 DNA。所有植物基因组 DNA 的获得都包括两个步骤：一是裂解细胞和溶解 DNA；二是通过一种或多种酶学或化学的方法除去蛋白质、RNA 和其他大分子杂质。
不同植物、同种生物的不同种类、同一种类的不同组织器官因其细胞结构和所含成分不同，基因组 DNA 提取方法既有共同的操作方法，也有特殊的处理步骤。在提取某些特殊组织器官 DNA 时，需要参考前人经验采用相应的改良提取方法，从而获得高质量的可用 DNA 大分子。如从富含多酚和多糖的组织中提取 DNA，应增加除去多酚和多糖的实验步骤，以免残留物抑制后续的酶切、PCR 等操作。
不同的实验目的对提取的 DNA 质量要求也不相同。构建基因组文库、基因分型、RFLP（限制性片段长度多态性）和 Southern 杂交等实验对初始 DNA 长度要求较大，而普通 PCR 反应则要求较低。植物基因组 DNA 在提取过程中会发生机械断裂，产生不同大小的片段，因此，应该尽量减少酚/氯仿抽提次数、混匀过程要轻缓，以保证得到较为完整的基因组 DNA。
目前，CTAB 法是植物基因组 DNA 提取的常用方法之一，是由 Murray 和 Thompson（1980）修改而成的简便方法。后续一些研究者对该法进行了改进和发展。
二、实验原理
CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当溶液盐浓度降低到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将 CTAB–核酸的复合物与蛋白、多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀 DNA，而 CTAB 溶于乙醇或异丙醇而除去。
在 CTAB 提取缓冲液中，Tris–HCl（pH 8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA 螯合 Mg2+或 Mn2+，抑制 DNase 活性；NaCl 提供一个高盐环境，使 CTAB–核酸复合物充分溶解，存在于液相中；CTAB 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β–巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。
三、实验目的
1. 掌握核酸提取的原理和方法。
2. 认识核酸的基本性质以及操作核酸的基本步骤。
3. 掌握水平凝胶电泳的原理及注意事项。
4. 后续实验准备样品。
四、实验材料
小麦、玉米和水稻等植物的幼嫩叶片。可提前 4～7 d 在培养皿或育苗盘中播种、育苗，实验前剪取新鲜叶片。
五、试剂与仪器
液氮、CTAB 提取缓冲液、氯仿/异戊醇（24∶1）、异丙醇、70% 乙醇、TE 缓冲液、灭菌 ddH2O、琼脂糖、6 ×上样缓冲液、50 × TAE 电泳缓冲液、溴化乙啶 EB。
研钵、剪刀、微量移液器、灭菌 1.5 mL 离心管、灭菌枪头、锥形瓶、量筒。
台式离心机、水浴锅、电子天平、微波炉、电泳槽、电泳仪、紫外成像仪。
六、实验步骤及其解析
（一）植物基因组 DNA 提取
1．将 1 g 左右新鲜叶片剪成 1～2 cm 片段，搁置于研钵中，加入约 50 mL 的液氮，轻轻捣碎叶片，待液氮将要挥发完时，迅速研磨成白绿色粉末，置入 1.5 mL 离心管中。
不同植物、不同组织、不同年龄的材料提取 DNA 产率不同，植物幼嫩组织产率高。
尽量采用新鲜材料。若是–80℃ 冰箱保存的样品，研磨前应避免样品化冻变软。
100 mg 新鲜植物幼嫩组织可获得 5～15 μg DNA。适量分装样品粉末到离心管。
研磨得越细越好，以便很好地解离细胞、破碎细胞壁，并提高 DNA 产率。
液氮尽量一次加足。若需第二次加液氮，不要让飞浮起的粉末污染了液氮勺。
快速分装。加 CTAB 提取缓冲液前，粉末不能化冻变成绿色泥状物。将粉末从研钵转移到离心管前，可将勺和离心管在液氮预先冷冻一下。
......版面有限，更多详情见下方技术资料↓
在分析和研究 DNA 时，提取和纯化 DNA 是第一步操作，也是实验的基础。对于植物来说，DNA 主要存在于细胞核内，核内 DNA 占整个细胞 DNA 量的 90% 以上；核外的 DNA 主要有线粒体 DNA 和叶绿体 DNA。所有植物基因组 DNA 的获得都包括两个步骤：一是裂解细胞和溶解 DNA；二是通过一种或多种酶学或化学的方法除去蛋白质、RNA 和其他大分子杂质。
不同植物、同种生物的不同种类、同一种类的不同组织器官因其细胞结构和所含成分不同，基因组 DNA 提取方法既有共同的操作方法，也有特殊的处理步骤。在提取某些特殊组织器官 DNA 时，需要参考前人经验采用相应的改良提取方法，从而获得高质量的可用 DNA 大分子。如从富含多酚和多糖的组织中提取 DNA，应增加除去多酚和多糖的实验步骤，以免残留物抑制后续的酶切、PCR 等操作。
不同的实验目的对提取的 DNA 质量要求也不相同。构建基因组文库、基因分型、RFLP（限制性片段长度多态性）和 Southern 杂交等实验对初始 DNA 长度要求较大，而普通 PCR 反应则要求较低。植物基因组 DNA 在提取过程中会发生机械断裂，产生不同大小的片段，因此，应该尽量减少酚/氯仿抽提次数、混匀过程要轻缓，以保证得到较为完整的基因组 DNA。
目前，CTAB 法是植物基因组 DNA 提取的常用方法之一，是由 Murray 和 Thompson（1980）修改而成的简便方法。后续一些研究者对该法进行了改进和发展。
二、实验原理
CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当溶液盐浓度降低到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将 CTAB–核酸的复合物与蛋白、多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀 DNA，而 CTAB 溶于乙醇或异丙醇而除去。
在 CTAB 提取缓冲液中，Tris–HCl（pH 8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA 螯合 Mg2+或 Mn2+，抑制 DNase 活性；NaCl 提供一个高盐环境，使 CTAB–核酸复合物充分溶解，存在于液相中；CTAB 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β–巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。
三、实验目的
1. 掌握核酸提取的原理和方法。
2. 认识核酸的基本性质以及操作核酸的基本步骤。
3. 掌握水平凝胶电泳的原理及注意事项。
4. 后续实验准备样品。
四、实验材料
小麦、玉米和水稻等植物的幼嫩叶片。可提前 4～7 d 在培养皿或育苗盘中播种、育苗，实验前剪取新鲜叶片。
五、试剂与仪器
液氮、CTAB 提取缓冲液、氯仿/异戊醇（24∶1）、异丙醇、70% 乙醇、TE 缓冲液、灭菌 ddH2O、琼脂糖、6 ×上样缓冲液、50 × TAE 电泳缓冲液、溴化乙啶 EB。
研钵、剪刀、微量移液器、灭菌 1.5 mL 离心管、灭菌枪头、锥形瓶、量筒。
台式离心机、水浴锅、电子天平、微波炉、电泳槽、电泳仪、紫外成像仪。
六、实验步骤及其解析
（一）植物基因组 DNA 提取
1．将 1 g 左右新鲜叶片剪成 1～2 cm 片段，搁置于研钵中，加入约 50 mL 的液氮，轻轻捣碎叶片，待液氮将要挥发完时，迅速研磨成白绿色粉末，置入 1.5 mL 离心管中。
不同植物、不同组织、不同年龄的材料提取 DNA 产率不同，植物幼嫩组织产率高。
尽量采用新鲜材料。若是–80℃ 冰箱保存的样品，研磨前应避免样品化冻变软。
100 mg 新鲜植物幼嫩组织可获得 5～15 μg DNA。适量分装样品粉末到离心管。
研磨得越细越好，以便很好地解离细胞、破碎细胞壁，并提高 DNA 产率。
液氮尽量一次加足。若需第二次加液氮，不要让飞浮起的粉末污染了液氮勺。
快速分装。加 CTAB 提取缓冲液前，粉末不能化冻变成绿色泥状物。将粉末从研钵转移到离心管前，可将勺和离心管在液氮预先冷冻一下。
......版面有限，更多详情见下方技术资料↓