免疫沉淀-磁珠法和琼脂糖树脂法_公司新闻

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免疫沉淀-磁珠法和琼脂糖树脂法

人阅读发布时间：2021-12-30 14:53

免疫沉淀-磁珠法和琼脂糖树脂法

什么是免疫沉淀技术（Immunoprecipitation,IP）
免疫沉淀技术是基于传统亲和纯化方法开发的，在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及固相结合物，形成“抗原-抗体-固相结合物免疫复合物“，清洗后去除溶液中未结合的其他蛋白，然后检测是否存在目的蛋白。免疫沉淀的目标是仅分离足够用于Western Blot或其他检测方法检测所需的目的蛋白。可以将已处理和未处理的样品进行比较来评估目标蛋白的相对量。
在免疫沉淀实验中，用于检测的抗体可以是预固定的也可以是游离的。虽然预固定抗体法更适用于IP，当目标蛋白浓度较低、抗体与抗原的结合力较弱的情况下，可以使用游离的抗体以形成免疫复合物，效果会比较好。

图1. 免疫沉淀预固定抗体和游离抗体流程图

免疫沉淀固相物质的选择
免疫沉淀固相物质使用较为广泛的有磁珠法和琼脂糖树脂法。磁珠对于小型蛋白和蛋白复合物的分离可实现结合能力、得率、可重复性、纯度和成本节约之间的平衡。磁性分离不需要离心，所以不会导致抗体-抗原结合破坏和目标蛋白损失现象。当需要纯化大量目标蛋白用于下游分析，且特异性抗体较易获得，琼脂糖树脂纯化较为适用。
免疫沉淀磁珠法和琼脂糖树脂法的优势
抗体结合能力 琼脂糖树脂是多孔的，其具有较大的表面积-体积比，对抗体的结合能力较高。磁珠的理论结合能力要比琼脂糖低。但是，固定在琼脂糖上的抗体可能会在洗涤步骤（离心）中流失。相反，结合在磁珠表面的抗体很少会在温和的洗涤步骤（磁体）中丢失。因此，尽管磁珠的抗体结合能力不如琼脂糖，但最终的抗原得率通常与琼脂糖相似或比琼脂糖更高。
可重复性和纯度 使用琼脂糖树脂法时，很难在不靠近和破坏一些沉淀树脂的前提下完全移除缓冲液。使用磁珠法时，所有磁珠在磁力架的吸附作用下固定在管壁，所以无需碰触磁珠即可移除缓冲液。此外，琼脂糖树脂法通常需要较长的孵育时间和预纯化步骤。磁珠法所有的相互作用均发生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠法的可重复性和纯度通常高于琼脂糖树脂法。磁珠法一般不需要预纯化步骤。
免疫沉淀效率 琼脂糖树脂法免疫沉淀需要较长的孵育时间、预纯化步骤和多次离心，所以其需要大量手动操作，总时间为1-1.5小时，而磁珠法免疫沉淀实验只需大约30分钟即可完成。
那么，Anti-Flag磁珠和Anti-Flag亲和凝胶这两款产品该如何选择呢？

产品名称	BeyoMag™ Beads	Affinity Gel (亲和凝胶)
固相支持物	磁珠	琼脂糖树脂
特异性	★★★★★	★★★★★
低背景	★★★★★	★★★★★
总蛋白结合量	★★★	★★★★★
靶蛋白得率	★★★★★	★★★
靶蛋白纯度	★★★★★	★★★★★
孵育时间短	★★★★★	★★★★
实验耗时短	★★★★★	★★★
主要用途	Co-IP、IP、蛋白纯化	Co-IP、IP、蛋白纯化
辅助设备（非离心情况下）	BeyoMag™磁分离架（FMS012/FMS024/FMS096）	可选用AKTA

碧云天提供多款磁珠法和琼脂糖树脂法免疫沉淀相关产品，特异性强，靶蛋白结合容量高，背景低，效果可媲美国际一线大牌产品，更有一系列免疫沉淀试剂盒，一站式配齐免疫沉淀所需试剂。

部分产品使用效果图：

图2. Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶)用于纯化E. coli中Flag融合蛋白的效果图。A. M：marker；1：细菌裂解液(cell lysate)；2：上样流穿液(flow through)；3-7：碱性(pH12.0)洗脱法时各洗脱液。B. M：marker；1：细菌裂解液(cell lysate)；2：上样流穿液(flow through)；3-7：3X Flag竞争洗脱法时各洗脱液。