干货分享 | Western Blot 实验第一步 —— 样本制备的注意事项和裂解液选择

蛋白质位置

推荐缓冲液

裂解缓冲液配方

全细胞

NP-40、

Triton X-100

或 RIPA

50 mM Tris；

150 mM NaCl；

1.0% NP-40

（或 Triton X-100 ）

细胞质

（可溶）

Tris-HCl

20 mM Tris-HCl，

pH 7.5

细胞骨架

蛋白

Tris-Triton

10 mM Tris，pH 7.4；

100 mM NaCl；

1 mM EDTA；

1 mM EGTA；

1% Triton X-100；

10% 甘油；

0.1% SDS；

0.5% 脱氧胆酸盐

细胞膜蛋白

RIPA 或细胞膜

蛋白抽提试剂盒

50 mM Tris；

150 mM NaCl；

1.0% NP-40 或

Triton X-100；

0.5% 脱氧胆酸钠；

0.1% SDS

细胞核蛋白

RIPA 或线粒体

分离试剂盒

根据试剂盒

说明书进行操作

抑制蛋白酶

/磷酸酶类型

加入裂解液

中的终浓度

储存液

(store at

-20°C 

或者 -80℃，

不得多次

反复冻融)

PMSF

丝氨酸、

半胱氨酸蛋白酶

1 mM

用乙醇、

甲醇

或者异丙醇

稀释至

100 mM

AEBSF

丝氨酸蛋白

酶抑制剂

2 mM

水或者

DMSO

配制 10 mM

E-64 (Proteinase inhibitor E 64)

半胱氨酸

蛋白酶

14 μM

DMSO

配制，

溶解度≥53.6

mg/mL

抑肽酶

(Aprotinin )

丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶

2 μg/mL

用水配制至

10 mg/mL

亮肽素

(Leupeptin )

丝氨酸、

半胱氨酸和

苏氨酸蛋白酶、

溶酶体蛋白酶

5–10

μg/mL

用水配制，

水中溶解度

可以达到

95 mg/mL

胃酶抑素A 

(Pepstatin A )

天冬氨酸蛋白酶

1 μg/mL

用甲醇稀释

至1 mM

EDTA

金属蛋白酶

1-5 mM

用水配制至

0.1-0.5 M。

pH 调节至

8.0

焦磷酸钠

（sodium pyrophosphate）

丝氨酸/

苏氨酸磷酸酶

1 mM

用水配制：

溶解度可达

(70mg/ml)