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上海研谨生物科技有限公司
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技术资料/正文
Na+ K+-ATP 酶活性测定说明书
281 人阅读发布时间：2020-04-20 18:11
Na+ K+-ATP 酶活性测定说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
Na+ K+- ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成 ADP和无机磷。
测定原理：
Na+ K+-ATP 酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×3支，-20℃保存。用时每支加1mL蒸馏水，现用现配。用不完的试剂-20℃
可保存一周。
试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×1 瓶，4℃保存。用时加入 3mL 蒸馏水， 4℃保存。
试剂七：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
试剂八：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
试剂九：液体 25mL×1 瓶，室温保存。
试剂十：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL标准磷应用液配制：将贮备液20倍稀释，即取0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水
充分混匀。
定磷剂的配制：按 H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
样品酶液的制备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
操作步骤
1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应（在 EP 管中加入下列试剂）
猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体（IgG）诊断试剂盒
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
Na+ K+- ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成 ADP和无机磷。
测定原理：
Na+ K+-ATP 酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×3支，-20℃保存。用时每支加1mL蒸馏水，现用现配。用不完的试剂-20℃
可保存一周。
试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×1 瓶，4℃保存。用时加入 3mL 蒸馏水， 4℃保存。
试剂七：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
试剂八：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
试剂九：液体 25mL×1 瓶，室温保存。
试剂十：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL标准磷应用液配制：将贮备液20倍稀释，即取0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水
充分混匀。
定磷剂的配制：按 H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
样品酶液的制备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
操作步骤
1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应（在 EP 管中加入下列试剂）
猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体（IgG）诊断试剂盒