Maiia Diagnostics-优化EPO纯化流程：科学解析免疫亲和纯化技术的最新进展

优化EPO纯化流程：科学解析免疫亲和纯化技术的最新进展

Easy-to-use EPO Purification kits from MAIIA Diagnostics offer a unique system for rapid immuno-affinity purification and concentration of erythropoietins (EPO) from aqueous media such as urine, serum, plasma, dried blood spots (DBS) or cellculture medium.

The anti-EPO column in the kits is immobilized with anti-EPO antibody 3F6 or 7D3 which captures both endogenous erythropoietin (hEPO) and recombinant erythropoietin (rhEPO) such as Epoetins, NESP, CERA and EPO-Fc. The kits are intended to be used as a preanalytical sample preparation step for further analysis with techniques such as isoelectric focusing (IEF), SARCOSYL polyacrylamide gel electrophoresis (SAR-PAGE) and Membrane Assisted Isoform ImmunoAssay (MAIIA). Several purifications can simultaneously be handled if using appropriate laboratory equipment.

 

促红细胞生成素（Erythropoietin， EPO）及其类似物的精准检测与纯化，在生物医药研发、反兴奋剂科学及临床诊断等多个领域均扮演着至关重要的角色。样品的预处理——尤其是高效、特异性的免疫亲和纯化步骤，是确保后续分析（如SAR-PAGE、质谱或活性测定）准确性和灵敏度的基础。MAIIA Diagnostics公司专注于为这一关键步骤提供前沿解决方案，其EPO纯化产品系列基于固相化的抗EPO单克隆抗体，旨在以标准化的操作流程，实现复杂生物样本中EPO及其受体激动剂（ERAs）的高回收率、高特异性纯化，满足从基础研究到合规性检测的多样化需求。

一、 技术核心：从经典柱式纯化到创新凝胶纯化系统

MAIIA Diagnostics的EPO纯化技术发展，体现了对实验流程简化和性能优化的持续追求。

• 经典柱式纯化技术：早期的EPO纯化试剂盒（EPO Purification Kit， EPK）采用预装填的微柱形式，利用抗体包被的一次性层析柱，通过离心或真空负压驱动样本流经，特异性捕获EPO。该方法已证明能高效地从尿液、血浆等多种基质中纯化EPO，移除约99.7%的非目标蛋白质，并将目标物浓缩高达240倍，显著提升了后续分析的检测限。

• 新一代凝胶纯化技术：为应对更高通量、更简化操作的需求，MAIIA推出了EPO纯化凝胶试剂盒（EPO Purification Gel Kit， EPGK）。该技术采用悬浮态的抗EPO琼脂糖凝胶珠替代固定柱体。用户只需将凝胶与样本在管中混合孵育，后续通过简单的离心步骤即可完成结合、洗涤和洗脱。这种设计极大地减少了手动操作时间，并支持同时对多样本进行平行处理，显著提升了实验室的样本处理通量。对比研究表明，EPGK在检测限（LOD）、线性、回收率等关键性能指标上与传统EPK表现相当甚至更优。

• 1340 Funnel Pack F40；
  1420 Funnel Pack F20；
  1390 EPO Purification Kit 3F6；
  1460 EPO Purification Gel Kit 7D3, For Urine and Blood；

性能对比与选择指南

二、 应用验证：满足最严苛的国际标准

MAIIA EPO纯化产品的可靠性已在全球多个独立实验室得到严格验证，特别是在反兴奋剂这一对方法学要求极为严苛的领域。

• 符合世界反兴奋剂机构（WADA）最新规范：2024年发表的一项系统性研究评估了MAIIA的新型EPO纯化凝胶试剂盒（7D3克隆）用于人尿液样本的表现。该研究按照WADA技术文件TD2024EPO的标准，对试剂盒的选择性、最低要求性能水平下的可靠性、检测限、残留和回收率等参数进行了全面验证。结果表明，该试剂盒完全符合TD2024EPO的标准和要求，为从人尿液中纯化ERAs以进行兴奋剂分析提供了有效的解决方案。

• 广泛的适用性与稳定的性能：无论是研究内源性EPO，还是各类重组EPO类似物（如阿法依泊汀、达依泊汀α、CERA等），MAIIA的纯化方案均表现出高且稳定的回收率。实验证明，该纯化过程不会改变EPO的天然糖基化异构体分布，这对于依赖异构体模式进行鉴别分析的检测方法（如等电聚焦电泳）至关重要。其优异的重现性体现在日间、日内及不同操作者之间的结果变异极小。

三、 超越反兴奋剂：生物医药研发与生产中的关键工具

EPO纯化技术的应用远不止于兴奋剂检测。在生物制药的研发与生产环节，对重组人EPO进行高效的捕获和纯化是获取高纯度活性蛋白的关键步骤。

• 重组蛋白生产流程中的整合：在重组EPO的细胞培养工艺中，收集的无血清培养上清液经过滤和透析后，可直接使用MAIIA的EPO纯化凝胶进行亲和纯化。该步骤能快速从复杂培养基背景中捕获目标EPO，作为下游精细纯化（如离子交换层析）前的有力预处理，或直接用于小规模制备高纯度研究样品。纯化后的EPO可用于后续的浓度测定、糖基化分析（如唾液酸含量检测）及生物活性研究。

四、 操作流程与技术支持

MAIIA为每款试剂盒提供了详细的标准操作流程（SOP），确保用户能快速建立稳定可靠的方法。典型的凝胶纯化流程包括四个核心步骤：

1. 结合：将处理后的生物样本与定量的抗EPO凝胶珠在适宜缓冲液中混合，室温下温和孵育约90分钟。

2. 洗涤：通过离心沉淀凝胶珠，弃去上清，并使用专用洗涤缓冲液清洗，以去除非特异性吸附的杂质。

3. 洗脱：使用低pH或竞争性洗脱缓冲液，将高纯度的EPO从凝胶珠上解离下来。

4. 中和与分析：收集的洗脱液通常需立即中和，以便用于后续的各类电泳、免疫印迹或质谱分析。

总结

选择高效的EPO纯化工具，是优化整个分析或生产流程的基石。MAIIA Diagnostics通过其创新的凝胶纯化技术与经典的柱式纯化平台，为用户提供了灵活、高效且经过国际标准验证的解决方案。无论您的目标是构建符合WADA TD2024EPO等严格法规的检测方法，还是需要在生物研发中快速获取高纯度的EPO样品-，MAIIA的专业产品线都能为您的科学探索提供坚实可靠的技术支持。