JHH-2人肝癌细胞：操作指南与应用前景全解析

 细胞介绍
 
     JHH-2人肝癌细胞是1988年由一名患由肝癌的57岁日本人的肝脏转移的腹水组织构建的成纤维样人的肝癌细胞系，这些细胞可以移植到裸鼠身上，染色体的模式是70。没有观察到HBV-DNA的整组织来源： 肝癌组织
细胞特性： 贴壁生长，具有高转移潜能与耐药性，能分泌甲胎蛋白（AFP），是肝癌研究的理想模型。

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一、实操指南：培养与保藏全流程

1. 复苏流程（冰浴快速法）
① 取出冻存管立即置37℃水浴，90秒内完全融化
② 转移至含6ml完全培养基（DMEM+10% FBS）的15ml离心管
③ 1000rpm离心5分钟，弃上清后重悬接种
关键点：冻存液DMSO需彻底去除，首次换液在培养4小时后进行

2. 消化传代（精准计时法）
① 弃旧液，PBS清洗2次
② 加入0.25%胰酶（含0.02% EDTA）覆盖瓶底
③ 37℃消化1-3分钟（镜下见细胞间隙增大立即终止）
④ 加3倍体积完全培养基终止
⑤ 轻柔吹打＜10次，按1：3-1：6分瓶
经验提示：消化过度易导致聚团，影响后续实验

3. 冻存保藏（程序降温法）
① 取对数生长期细胞（融合度80-90%）
② 配制冻存液：90%FBS + 10%DMSO
③ 细胞悬液与冻存液1：1混合
④ 分装冻存管（推荐1ml/管）
⑤ 程序降温：4℃(30min)→-20℃(2h)→-80℃(过夜)→液氮
重要提醒：液氮罐需定期补充液氮，建议双备份储存

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二、难点突破与关键注意事项

1. 三大培养痛点解决方案
▶ 细胞聚团：降低胰酶浓度至0.05%，改用Accutase消化
▶ 生长迟缓：增加FBS至15%，添加1%非必需氨基酸
▶ 污染防控：操作台紫外线消毒30min，培养基添加1%双抗

2. 生死攸关的注意事项
⚠️ 严禁反复冻融（存活率直降40%）
⚠️ 传代密度＜30%将导致生长停滞
⚠️ 换液时保留1/3原培养基减轻胁迫
⚠️ 定期支原体检测（每月1次PCR检测）

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三、科研与产业价值全景分析

1. 基础研究领域
• 肝癌转移机制（TGF-β/Smad通路研究）
• 肿瘤干细胞特性（CD133+细胞分选）
• 代谢重编程（糖酵解靶点验证）

2. 药物开发平台
√ 化疗耐药模型（对5-Fu天然耐药）
√ 靶向药筛选（索拉非尼应答测试）
√ 免疫疗法评估（PD-L1表达调控）

3. 临床转化方向
➤ 液体活检标志物（外泌体miRNA谱）
➤ 类器官模型构建（基质胶3D培养）
➤ 个体化药敏平台（PDX模型种子源）

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