探秘ZMAC-4猪巨噬细胞：科研利器，助力猪疫病研究

        ZMAC-4细胞系源自猪肺泡巨噬细胞，具备强大吞噬、抗原提呈与细胞因子分泌能力，是研究猪传染病免疫机制、疫苗评价、药物筛选的核心工具。北京百欧博伟生物技术有限公司为您深入解读ZMAC-4细胞的标准化操作流程与科研价值。

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一、ZMAC-4细胞标准化操作流程

1. 复苏：唤醒冷冻的免疫卫士

   • 快速解冻： 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴，轻轻摇动至完全融化（约1-2分钟）。

   • 稀释与离心： 将细胞悬液转移至含5-10ml预温完全培养基（如DMEM高糖 + 10%胎牛血清 + 1%双抗）的离心管。轻柔混匀后，300-500 × g 离心5分钟。

   • 重悬与接种： 弃上清，用新鲜完全培养基重悬细胞，接种至培养瓶/皿（推荐密度：0.5-1×10⁵ cells/cm²）。

   • 培养： 放入37℃、5% CO₂培养箱。24小时后更换新鲜培养基，去除未贴壁死细胞。

2. 培养：维持细胞的活性与功能

   • 培养基： DMEM高糖 + 10%优质胎牛血清 + 1%青霉素-链霉素双抗溶液（推荐）。

   • 换液： 每2-3天更换一次新鲜完全培养基。

   • 传代（消化）：

     • 吸弃旧培养基，用预温的PBS轻柔洗涤细胞1-2次。

     • 加入适量消化液： 推荐使用温和的细胞刮刀物理刮取（对巨噬细胞损伤小），或含低浓度胰酶（0.05%胰酶-EDTA） + 细胞刮辅助。室温或37℃作用1-3分钟（显微镜下观察，大部分细胞变圆松动即可）。

     • 终止消化： 加入含血清的完全培养基（体积≥消化液2倍），轻轻吹打细胞层，使细胞脱落成单细胞悬液。

     • 离心与重悬： 收集悬液离心（300-500 × g，5分钟），弃上清，新鲜培养基重悬。

     • 接种： 按1:2至1:4比例接种至新培养器皿（根据细胞生长速度调整）。

   • 状态监测： 每日显微镜观察，健康ZMAC-4呈梭形或不规则形，贴壁良好，胞质丰富，可有伪足伸出。

3. 保藏：细胞的长期休眠

   • 冻存液： 完全培养基 + 10% DMSO（细胞冻存级），或使用商品化无血清冻存液（效果更佳）。

   • 冻存密度： 1×10⁶ 至 5×10⁶ cells/ml。

   • 程序降温：

     • 细胞悬液与冻存液混匀，分装至冻存管。

     • 使用程序降温盒（如Mr. Frosty™），置于-80℃冰箱过夜（约以1℃/min降温）。

     • 次日转移至液氮气相（-150℃至-196℃）长期保存（避免直接浸入液氮液相，以防安瓿瓶爆裂）。

   • 短期保存： -80℃冰箱可保存数周至数月（非最佳）。

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二、培养难点与关键注意事项

1. 难点分享：

   • 贴壁性强，消化敏感： 过度消化（胰酶浓度过高或时间过长）会严重损伤细胞活性和功能。物理刮取法更温和可靠。

   • 生长速度不均： 巨噬细胞生长可能不如传代细胞系快且均一，需耐心观察。

   • 状态易波动： 对血清质量、培养基pH、渗透压、温度变化敏感。批次血清需预测试。

   • 支原体污染风险： 巨噬细胞易受支原体污染且不易察觉。定期检测至关重要。

   • 功能维持： 长期体外培养可能导致部分固有免疫功能减弱。控制传代次数（建议<15代）。

2. 关键注意事项：

   • 无菌操作： 全程严格无菌操作，超净台内进行。

   • 温柔以待： 吹打、离心、换液动作务必轻柔，避免机械损伤。

   • 环境稳定： 确保培养箱温度、CO₂浓度稳定且校准准确。

   • 优质耗材： 使用细胞专用培养瓶/皿和优质血清。

   • 及时传代： 细胞密度达80-90%即需传代，避免过度生长导致分化或死亡。

   • 定期检测： 定期进行支原体检测和细胞形态/功能验证。

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三、应用前景：猪健康与疫病防控的科研基石

1. 非洲猪瘟（ASF）研究核心模型：

   • 模拟ASFV体内感染靶细胞过程，研究病毒入侵、复制、免疫逃避机制。

   • 评价ASF疫苗诱导的细胞免疫应答（如细胞毒性、细胞因子分泌）的关键平台。

   • 筛选抗ASFV药物或中和抗体的重要工具。

2. 其他重要猪病研究：

   • 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）： 研究病毒与巨噬细胞互作、免疫抑制机制。

   • 猪圆环病毒病（PCVD）： 探究病毒在巨噬细胞中的复制及免疫调节作用。

   • 猪流感（SIV）： 研究肺部免疫应答及继发细菌感染的机制。

   • 细菌性疾病： 研究猪传染性胸膜肺炎、猪链球菌病等病原体与巨噬细胞的互作。

3. 疫苗评价与佐剂开发：

   • 体外评价疫苗（尤其是新型疫苗如mRNA、病毒载体疫苗）激活巨噬细胞、诱导抗原提呈和细胞因子释放的能力。

   • 测试新型佐剂对巨噬细胞活化效果。

4. 免疫调节与药物筛选：

   • 研究免疫增强剂或免疫抑制剂对猪巨噬细胞功能的影响。

   • 筛选调节巨噬细胞炎症反应（如抗炎）或吞噬功能的药物。

5. 生物治疗探索：

   • 作为基因工程或药物载体的潜在工具细胞（处于早期研究阶段）。

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四、结语

       ZMAC-4猪巨噬细胞作为体外研究猪呼吸道病原感染、宿主免疫应答及评价防控产品的“黄金标准”模型，在保障生猪健康、防控重大疫病（尤其是ASF）的科研与转化应用中发挥着不可替代的作用。掌握其规范化的复苏、培养、保藏技术，并深刻理解操作难点与注意事项，是获取可靠实验数据、推动猪病研究进展的基础。

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