探索菌种知识：了解其多样性与应用

　　菌种，作为发酵过程中的关键活细胞催化剂，涵盖了细菌、放线菌、酵母菌以及霉菌这四大类别。它们源自自然界中丰富的微生物群落，经过精心分离与筛选，挑选出对生产有益的菌种，并经过改良后，妥善贮存以备生产之需。

　　接下来，让我们一起探索菌种的小知识。

　　菌种代码的含义

　　在国内，微生物检验中常用的菌种代号包括：CMCC（F）和CMCC（B）。其中，CMCC代表中国医学菌种保藏中心，而B和F则分别代表细菌和真菌。例如，大肠杆菌的代号为CMCC（B）44102，乙型副伤寒沙门杆菌的代号为CMCC（B）50094。

　　菌种的复苏与保存

　　在超净工作台或生物安全柜内，遵循菌种的使用说明和复苏液，进行菌种的复苏和保存操作。

　　常用菌种保藏方法

　　琼脂斜面低温保存法

　　该方法涉及将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（或某些特殊菌种使用的液体培养基）上，经过规定的温度和时间培养后，将新鲜菌种用牛皮纸包好，并换成橡胶塞以减少水分蒸发。随后，将菌种保藏在4℃左右的冰箱中，并每隔2~3个月进行一次传代。若使用半固体高层培养基进行穿刺培养，则保藏期可达半年至一年。

　　该方法适用于细菌、酵母菌和霉菌的保藏，其优点在于简便易行，不需要另外选择保藏用培养基，且对大多数微生物都适用。然而，也存在一些缺点，如保藏期相对较短，需要频繁传代，存在变异和污染的风险。因此，在操作过程中需要注意确保保藏的菌种是生命力旺盛的新鲜培养物，并定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞状态。每次移植后，还需与原菌种的编号、名称进行核对，确认培养基特征和纯度无误后方可继续保藏。同时，保藏菌种的培养基应无糖或含糖量低于2%，以避免产酸过多影响菌种存活。

　　铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，因此不适宜采用本法进行保存。

　　接下来，我们将介绍另一种常用的菌种保藏方法——液体石蜡保存法。该方法首先将菌种接种于斜面或穿刺于3~5%琼脂半固体高层培养基中，经过培养后备用。随后，将化学纯的液体石蜡装入试管中，经过高压灭菌处理，并去除其中的水分。最后，将处理好的液体石蜡加入培养好的菌种试管内，以高出培养基最上端1cm为宜，将试管直立放入4℃冰箱中保藏。该方法适用于部分霉菌、酵母菌和放线菌的保藏，对细菌的保藏效果稍差。其优点在于简便易行，通过使菌种与空气隔绝来达到保藏的目的。

　　在使用时需注意，保藏前要确保使用新鲜培养物并检查纯度和特征。接种时，应先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养。此外，还要注意液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度控制，以及制备无菌液体石蜡时的装量控制，以避免污染和影响保藏效果。

　　此外，还有磁珠保存法可供选择。该方法将菌液浸入素烧磁珠或多孔玻璃珠后进行干燥保存。在螺旋口试管中加入适量的硅胶或无水CaSO4，上铺玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，经过干热灭菌后接入菌悬液。最后，可以选择冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。该方法对酵母菌特别有效，适用于根瘤菌等菌种的长期保藏。其优点在于保藏时间长，操作简便，减轻了操作人员的工作负担。

　　菌种的传代与保存

　　方法一：斜面传代

　　从冰箱取出的菌种斜面，需在室温下平衡约30分钟，待其温度稳定后，再移入超净工作台或生物安全柜进行操作。点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰，右手持接种棒后端，将接种环在火焰上烧灼30秒。随后，将整个接种棒在火焰上烧灼并往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住试管塞，拨开试管塞，将接种环伸入管内，先在近壁的琼脂斜面上轻靠，稍作冷却后，再移至菌苔上，刮取少量菌苔。取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁进行灭菌处理。堵上试管塞后，取一支营养琼脂斜面，按照上述步骤打开试管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由底向上轻贴斜面表面曲折移动，使细菌划在斜面上。最后，在火焰旁将试管塞堵上，并将接种棒在火焰上烧灼灭菌。将已接种的斜面置于3537℃下培养2224小时，霉菌管则置于20~25℃霉菌培养箱内培养7日。培养完成后，将其放入冰箱保存，一般每3个月转种一次。

　　方法二：斜面-营养肉汤-分离平板-斜面

　　用接种环取上述斜面菌苔少许，接种至营养肉汤中（每支5ml，已灭菌），置于3537℃下培养1824小时。随后，再取培养好的营养肉汤菌悬液，接种于分离平板上，继续置于3537℃下培养1824小时。用接种针选取典型菌落，划线于营养琼脂斜面上，并再次置于3537℃下培养1824小时。通常同时接种多支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其余作为工作菌种使用。

　　常用分离平板包括：大肠埃希菌使用EMB琼脂平板，铜绿假单胞菌使用溴化十六烷三甲铵琼脂培养基，金黄色葡萄球菌则选用甘露醇氯化钠琼脂培养基。

　　菌种保管

　　菌种保管需专人负责并实行双人双锁管理，确保菌种安全无虞。同时，菌种的领用、传代和保存过程都应有详细记录，包括菌种名称、入库、领用、传代日期、鉴定者信息以及主要鉴定性能等。此外，对于灭活或销毁的菌种也应有明确记录。

　　菌种的传代与保存是微生物实验中的关键环节。通过斜面传代法，我们可以将菌种从冰箱取出后，经过适当的处理，接种到营养琼脂斜面上进行培养。而斜面-营养肉汤-分离平板-斜面的方法，则更适用于需要进一步分离纯化的菌种。在菌种保管方面，我们需要专人负责，并实行严格的双人双锁管理，以确保菌种的安全与完整。同时，对于菌种的领用、传代和保存过程，都应详细记录，以便于追溯与监控。