微生物检测方法和步骤有哪些？

　　微生物涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉及食品、医药、工农业、环保等诸多领域。有效地进行微生物检测，确定微生物的含量，才能采取有效的措施，从而保障人们的身体健康不受微生物的危害。

　　微生物检测方法

　　1、电子计数器计数法

　　电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。

　　该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。

　　2、计数器测定法

　　即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。

　　由于计数室的容积是一定的（0.1mm³)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果，不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。

　　3、比浊法

　　比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度（OD值）表示样品菌液浓度。

　　此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。

　　4、测定细胞总氮量或总碳量

　　氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于浓度较高的微生物检测。

　　5、活细胞计数法

　　常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。

　　此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的微生物检测方法。使用该法应注意：

　　①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；；

　　②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入0.001%的2,3,5－氯化三苯基四氮唑（TTC);

　　③本法限用于形成菌落的微生物。广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是常用的微生物检测方法。

　　6、测定细胞重量法

　　此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放入干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高的样品，是微生物检测的一种常用方法。

　　微生物检测步骤

　　一、接种

　　将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

　　二、分离纯化

　　含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixed culture)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。

　　在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

　　三、培养

　　1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。

　　2、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。

　　四、常规鉴定技术

　　(一)形态结构和培养特性观察

　　(二)生理生化试验

　　(三)化学成分分析

　　五、微生物保存

　　基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。基本措施是低温、真空、干燥。