冻存后细胞复苏的步骤及注意事项

　　真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂，24小时后要更换培养基。

　　一、材料

　　培养基，37’C预热

　　培养瓶

　　装有70％乙醇的烧杯

　　1ml、10ml的移液管、移液器及移液头

　　二、步骤

　　把冻存细胞的管子在37’C的水浴融化，快速摇动，1分钟内使管内的细胞融化。

　　把融化的管子浸入装有70％乙醇的烧杯内，整个实验在超净台内进行。

　　小心打开冻存管，不要让乙醇浸入管内。

　　将冻存管内的细胞转移到培养瓶中，并立即加入预热的培养基。

　　盖好培养瓶的盖子，培养24小时。

　　用新培养基替换老培养基。

　　继续培养2~3天或按说明书上的建议进行操作。

　　三、温馨提示

　　1.融解的细胞必须马上培养，如果来不及培养，就保存在液氮中。

　　2.细胞通常冻存为1 ml的体积，加入新的培养基至10ml。

　　3.可以在融化了冻存细胞后，把细胞离心下来，并用新鲜的培养基重新悬浮细胞，这种做法只适用于那些对冻存剂敏感的细胞，或者笫二天因为有事不能更换新培养基的情况。

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