HSF人皮肤成纤维细胞培养注意事项

　　一、产品信息：

　　1.平台编号：bio-111013

　　2.细胞名称：HSF(SV40转染)人真皮成纤维细胞永生化

　　3.物种：人

　　4.组织：皮肤

　　5.细胞形态：成纤维细胞样，贴壁生长

　　二、培养方式：

　　1.培养基：HSF(SV40转染)专用培养基【HSF(SV40转染)细胞专用培养基】2.培养环境：37℃、5%CO2

　　3.传代培养：当细胞密度达到80%以上时，可以进行传代，传代比例1:2~1:4，1~2天传代一次。

　　（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；

　　（2）加入1ml的PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将PBS吸出；

　　（3）加入1ml的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化1~3分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；

　　（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；（5）加入4ml含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；（6）将细胞悬液转移到15ml的离心管，1000rpm离心5min；

　　（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取10ml完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（8）将细胞悬液分装到两个新的T25细胞培养瓶中，放在37℃的CO2培养箱中进行培养。4.细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存3年，长期保存建议使用液氮罐。

　　5.冷冻复苏细胞：将含有1mL细胞冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　三、质量检测：

　　1.STR鉴定：正确

　　2.细菌检测：阴性

　　3.支原体检测：阴性

　　四、售后服务：

　　1.收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；

　　2.用75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40倍和100倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；

　　3.原瓶中的培养基不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4.建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后7天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。

　　5.强烈建议：在第一次细胞传代时，使用购买本公司配置的细胞培养基将细胞按照1:2进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。

　　如果有以上任何问题，请及时联系本公司。

　　五、注意事项：

　　1.本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2.若使用本产品发表科学论文，请标注：HSF(SV40转染)由北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）提供。

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