NP-69人鼻咽上皮细胞培养常见问题及解决办法

　　细胞名称：人鼻咽上皮细胞（STR鉴定正确）

　　细胞别名：NP69SV40T，NP-69

　　产品货号：TCH-C440

　　种属来源：人

　　组织来源：鼻咽

　　疾病特征：—

　　细胞形态：上皮细胞样

　　生长特性：贴壁生长

　　培养体系：NP69专用基础培养基+1%生长因子+1%P/S

　　配套培养基货号：TCH-G440

　　传代比例：1:2-1:4，每2-3天换液一次

　　传代周期：24-48 h

　　培养条件：气相：94%空气+6%CO2，温度：37℃

　　冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

　　NP69细胞培养要点

　　①该细胞对培养基要求较高，推荐培养基为NP69专用培养基+1%生长因子+P/S，不能与其他培养基体系共用。

　　②该细胞传代或复苏之后可能需要2天及以上才能完全贴壁，完全贴壁前尽量少移动细胞，换液时动作要轻，切勿使劲冲洗细胞。

　　NP69细胞常见问题与解决方法

　　问题1：培养细胞死亡

　　可能原因：

　　①胰蛋白酶消化过度

　　②支原体污染

　　③消化液或培养液配置错误、过期储存或储存不当

　　④细胞老化（如传代前细胞汇合度过高会导致其失去贴附性）

　　⑤接种细胞起始浓度太低或太高

　　建议解决办法：

　　①缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度，建议加入0.25%提前预热

　　的胰酶置于37℃消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细

　　胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化）

　　②分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物并对实验环境进行消毒灭菌

　　③重新配置消化液或培养液

　　④启用新的保种细胞

　　⑤调节最佳接种细胞浓度

　　问题2：细胞复苏失败

　　可能原因：

　　①可能是未使用专用培养基复苏细胞

　　②细胞复苏时解冻时间过长导致细胞死亡

　　③细胞冻存前是否过密

　　建议解决办法：

　　①推荐使用海星NP69细胞专用培养基，货号：TCH-G440

　　②细胞复苏动作要快，手法要轻柔

　　③在细胞冻存前调整合适的细胞密度

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