北京百欧博伟生物293T人胚肾细胞培养攻略及说明

　　一、293T人胚肾细胞简介

　　293细胞是人肾上皮细胞系，有多种衍生株，比如HEK293，293T/17等，来源都是人胚胎肾细胞，其极少表达细胞外配体所需的内生受体，且比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

　　293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，从而提高外源基因的表达水平。因此293T细胞广泛应用于病毒包装。用磷酸钙转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。

　　细胞名称：293T（人胚肾细胞）

　　种属：人

　　年龄（性别）：胎儿

　　组织来源：肾

　　生长特性：贴壁

　　细胞形态：上皮细胞样

　　背景描述：293T细胞是293[HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。

　　生长培养基：DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　二、培养方式：

　　1.培养基：293T[HEK-293T]专用培养基【DMEM高糖培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%】

　　2.培养环境：37℃、5%CO2

　　3.传代培养：当细胞密度达到80%以上时，可以进行传代，传代比例1:2~1:4，1~2天传代一次。

　　（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；

　　（2）加入1ml的PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将PBS吸出；

　　（3）加入1ml的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化1~3分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；

　　（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；（5）加入4ml含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；（6）将细胞悬液转移到15ml的离心管，1000rpm离心5min；

　　（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取10ml完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（8）将细胞悬液分装到两个新的T25细胞培养瓶中，放在37℃的CO2培养箱中进行培养。4.细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存3年，长期保存建议使用液氮罐。

　　5.冷冻复苏细胞：将含有1mL细胞冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　三、质量检测：

　　1.STR鉴定：正确

　　2.细菌检测：阴性

　　3.支原体检测：阴性

　　四、售后服务：

　　1.收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；

　　2.用75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40倍和100倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；

　　3.原瓶中的培养基不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4.建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后7天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。

　　5.强烈建议：在第一次细胞传代时，使用购买本公司配置的细胞培养基将细胞按照1:2进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。

　　如果有以上任何问题，请及时联系本公司。

　　五、注意事项：

　　1.本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2.若使用本产品发表科学论文，请标注：293T[HEK-293T]由北京百欧博伟生物技术有限公司（BIOBW）提供。