细胞裂解及裂解液澄清
196 人阅读发布时间:2022-07-18 14:43
(1)根据项目决定选择合适的裂解缓冲液将细胞重悬,一般细胞浓度为5%-20% (w/v),即1 g细胞用5-20 ml裂解缓冲液重悬;
(2)根据重悬液体积加入PMSF;
(3)重悬液体积不超过100 ml的选择超声波细胞粉碎机裂解,选择6#变幅杆,功率20%,工作3s,停止3s;裂解10-30 min,样品应置于冰水浴中;
(4)大体积发酵要选择高压细胞破碎仪裂解,大肠杆菌裂解压力为900 bar,裂解2次,酵母菌裂解压力为1200 bar,裂解3次;
(5)小体积裂解液用落地式冷冻离心机9000 g离心10 min澄清,离心前样品用电子天平配平;
(6)大体积发酵液用大容量冷冻离心机8500 rpm离心30 min,,离心前样品用电子天平配平,小心倒出上清液再重复离心一次,第二次离心的上清液用抽滤瓶抽滤澄清