枯草芽孢杆菌蛋白表达纯化测试
317 人阅读发布时间:2022-07-18 14:34
(1)挑选菌落PCR中若干个阳性克隆(项目需求),活化菌种:3ml (LB/2×YT) + 3μl Cm
- (5mg/ml) + 5μL 菌液,37℃培养过夜;
(2)转接 一般按1:25 ~ 1:50进行 ,接至3ml抗性培养基中,然后37℃ 220rpm摇床培
养约3-4h(转接前应了解表达条件,避免遗漏);
(3)打开UV 600nm 测量OD值 0.8~1.0 的范围内,按项目要求加入IPTG后不同诱导表
达条件进行诱导。表达完后收样(根据蛋白特性决定是否保留培养基上清),离心条件
11000rpm,1 min ;
(4)收集培养基,将菌体加入1ml1×PBS混匀后,超声(超声条件:探头编号2#、超声功
率45%、超声开2s、超声关2s、超声总时间3min)
(5)超声完后离心(12000rpm,1min),上清取200ul至新的EP管中,标记为“NPE”,沉淀加
入200ul 1×PBS(含8M尿素),混匀,标记为“DPE”;分别往NPE、DPE样品中加入50uL
还原性 5×loading buffer,轻摇混匀,勿上下颠倒,然后煮样,(放到设置好条件的金属浴
上,98℃,5min),待电泳检测。
资料格式:
枯草芽孢杆菌蛋白表达纯化测试SOP.pdf
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