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自营
AtaGenix
抗体/试剂/技术服务/细胞库 / 细胞培养
已认证品牌介绍
普健生物(武汉)科技有限公司由中法科学家于2011年联合成立于武汉，作为ProteoGenix在中国的研发生产基地，总面积4700平方米，其中GMP级别细胞房800平方米，配置一个100平方米的无菌、无内毒素纯化实验室;仪器设备投入逾2000万。作为武汉国家生物产业基地指定的光谷抗体发现与筛选公共服务平台，普健生物具备领先的技术实力和国际化发展的战略格局，专注于重组蛋白、抗体、诊断原料、抗体药物发现等自主技术平台的建设和下游生物医药产品的战略合作。公司立足于生命科学领域，自主建立生命科学研究平台、诊断原料开发平台、抗体药物研发平台，三大完善的技术服务平台：生命科学平台：拥有五大成熟高效的蛋白表达系统(哺乳动物细胞、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、昆虫细胞)，可提供蛋白表达、分子构建-蛋白表达纯化-结构解析、抗体重组表达、鼠/兔单克隆抗体制备以及相关检测服务；诊断原料开发平台：拥有开放式全自动化学发光平台，可缩短研发周期、降低开发成本与技术风险，为广大客户提供各种诊断核心原料开发；抗体药物发现平台以single B细胞抗体发现技术，杂交瘤筛选与噬菌体展示技术为主，目前已完成构建并对外提供抗体筛选技术服务的文库有：新冠特异性抗体噬菌体文库、羊驼天然纳米抗体噬菌体文库、兔源天然抗体噬菌体文库、小鼠天然抗体噬菌体文库、另外可为客户提供鼠/兔/鸡/猪/猫/狗等物种免疫噬菌体抗体文库构建及筛选服务。
自营
ProteoGenix
抗体/试剂/技术服务
已认证品牌介绍
ProteoGenix成立于2003年，致力于开发诊断试剂和生物治疗药物，以靶向其创始人发现的关键蛋白质。ProteoGenix的管理团队迅速认识到高质量抗体和蛋白质对于生物制药产品开发的重要性，并认识到它们在进入临床应用中的巨大潜力。ProteoGenix开发的生物分子的独特特性，使其能够成功克服进入临床应用过程中的诸多挑战。凭借在治疗性抗体和定制试剂方面的深厚经验，ProteoGenix迅速在生命科学领域建立了声誉。作为主要的合同研究组织(CRO)和生物制药领域的可信赖合作伙伴，ProteoGenix在显著提升生物分子进入IND申请的成功率方面取得了卓越成就。作为服务集成商，ProteoGenix全程引导客户从早期发现到临床应用。ProteoGenix的核心目标是从一开始就洞察生物分子的未来需求，并据此制定科学的开发策略。ProteoGenix提供广泛的创新解决方案和技术，依托超过15年的行业经验和稳固的国际地位，ProteoGenix在以下六大服务领域提供独特且定制化的服务：l 抗体工程(人源化、双特异性抗体、ADC、亲和力成熟、分子优化)生物工艺开发(无知识产权限制的稳定细胞系开发、发酵及生物反应器生产优化)单克隆和多克隆抗体开发(杂交瘤法和噬菌体展示)重组蛋白和抗体生产(大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞)基因合成肽合成ProteoGenix的研发实验室始终以创新为导向，通过不断优化技术流程，例如XtenCHOTM，一种瞬时表达细胞系，其生产效率超过了业界标杆ExpiCHO。此外，ProteoGenix还拥有一个包含超过20万种产品的广泛产品目录。产品涵盖抗体、蛋白质、ELISA试剂盒、细胞分离介质、核酸纯化试剂盒等，满足生命科学领域多样化的需求。
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抗体/试剂/技术服务/细胞库 / 细胞培养
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普健生物(武汉)科技有限公司由中法科学家于2011年联合成立于武汉，作为ProteoGenix在中国的研发生产基地，总面积4700平方米，其中GMP级别细胞房800平方米，配置一个100平方米的无菌、无内毒素纯化实验室;仪器设备投入逾2000万。作为武汉国家生物产业基地指定的光谷抗体发现与筛选公共服务平台，普健生物具备领先的技术实力和国际化发展的战略格局，专注于重组蛋白、抗体、诊断原料、抗体药物发现等自主技术平台的建设和下游生物医药产品的战略合作。公司立足于生命科学领域，自主建立生命科学研究平台、诊断原料开发平台、抗体药物研发平台，三大完善的技术服务平台：生命科学平台：拥有五大成熟高效的蛋白表达系统(哺乳动物细胞、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、昆虫细胞)，可提供蛋白表达、分子构建-蛋白表达纯化-结构解析、抗体重组表达、鼠/兔单克隆抗体制备以及相关检测服务；诊断原料开发平台：拥有开放式全自动化学发光平台，可缩短研发周期、降低开发成本与技术风险，为广大客户提供各种诊断核心原料开发；抗体药物发现平台以single B细胞抗体发现技术，杂交瘤筛选与噬菌体展示技术为主，目前已完成构建并对外提供抗体筛选技术服务的文库有：新冠特异性抗体噬菌体文库、羊驼天然纳米抗体噬菌体文库、兔源天然抗体噬菌体文库、小鼠天然抗体噬菌体文库、另外可为客户提供鼠/兔/鸡/猪/猫/狗等物种免疫噬菌体抗体文库构建及筛选服务。
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ProteoGenix成立于2003年，致力于开发诊断试剂和生物治疗药物，以靶向其创始人发现的关键蛋白质。ProteoGenix的管理团队迅速认识到高质量抗体和蛋白质对于生物制药产品开发的重要性，并认识到它们在进入临床应用中的巨大潜力。ProteoGenix开发的生物分子的独特特性，使其能够成功克服进入临床应用过程中的诸多挑战。凭借在治疗性抗体和定制试剂方面的深厚经验，ProteoGenix迅速在生命科学领域建立了声誉。作为主要的合同研究组织(CRO)和生物制药领域的可信赖合作伙伴，ProteoGenix在显著提升生物分子进入IND申请的成功率方面取得了卓越成就。作为服务集成商，ProteoGenix全程引导客户从早期发现到临床应用。ProteoGenix的核心目标是从一开始就洞察生物分子的未来需求，并据此制定科学的开发策略。ProteoGenix提供广泛的创新解决方案和技术，依托超过15年的行业经验和稳固的国际地位，ProteoGenix在以下六大服务领域提供独特且定制化的服务：l 抗体工程(人源化、双特异性抗体、ADC、亲和力成熟、分子优化)生物工艺开发(无知识产权限制的稳定细胞系开发、发酵及生物反应器生产优化)单克隆和多克隆抗体开发(杂交瘤法和噬菌体展示)重组蛋白和抗体生产(大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞)基因合成肽合成ProteoGenix的研发实验室始终以创新为导向，通过不断优化技术流程，例如XtenCHOTM，一种瞬时表达细胞系，其生产效率超过了业界标杆ExpiCHO。此外，ProteoGenix还拥有一个包含超过20万种产品的广泛产品目录。产品涵盖抗体、蛋白质、ELISA试剂盒、细胞分离介质、核酸纯化试剂盒等，满足生命科学领域多样化的需求。
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普健生物(武汉)科技有限公司由中法科学家于2011年联合成立于武汉，作为ProteoGenix在中国的研发生产基地，总面积4700平方米，其中GMP级别细胞房800平方米，配置一个100平方米的无菌、无内毒素纯化实验室;仪器设备投入逾2000万。作为武汉国家生物产业基地指定的光谷抗体发现与筛选公共服务平台，普健生物具备领先的技术实力和国际化发展的战略格局，专注于重组蛋白、抗体、诊断原料、抗体药物发现等自主技术平台的建设和下游生物医药产品的战略合作。公司立足于生命科学领域，自主建立生命科学研究平台、诊断原料开发平台、抗体药物研发平台，三大完善的技术服务平台：生命科学平台：拥有五大成熟高效的蛋白表达系统(哺乳动物细胞、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、昆虫细胞)，可提供蛋白表达、分子构建-蛋白表达纯化-结构解析、抗体重组表达、鼠/兔单克隆抗体制备以及相关检测服务；诊断原料开发平台：拥有开放式全自动化学发光平台，可缩短研发周期、降低开发成本与技术风险，为广大客户提供各种诊断核心原料开发；抗体药物发现平台以single B细胞抗体发现技术，杂交瘤筛选与噬菌体展示技术为主，目前已完成构建并对外提供抗体筛选技术服务的文库有：新冠特异性抗体噬菌体文库、羊驼天然纳米抗体噬菌体文库、兔源天然抗体噬菌体文库、小鼠天然抗体噬菌体文库、另外可为客户提供鼠/兔/鸡/猪/猫/狗等物种免疫噬菌体抗体文库构建及筛选服务。
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ProteoGenix成立于2003年，致力于开发诊断试剂和生物治疗药物，以靶向其创始人发现的关键蛋白质。ProteoGenix的管理团队迅速认识到高质量抗体和蛋白质对于生物制药产品开发的重要性，并认识到它们在进入临床应用中的巨大潜力。ProteoGenix开发的生物分子的独特特性，使其能够成功克服进入临床应用过程中的诸多挑战。凭借在治疗性抗体和定制试剂方面的深厚经验，ProteoGenix迅速在生命科学领域建立了声誉。作为主要的合同研究组织(CRO)和生物制药领域的可信赖合作伙伴，ProteoGenix在显著提升生物分子进入IND申请的成功率方面取得了卓越成就。作为服务集成商，ProteoGenix全程引导客户从早期发现到临床应用。ProteoGenix的核心目标是从一开始就洞察生物分子的未来需求，并据此制定科学的开发策略。ProteoGenix提供广泛的创新解决方案和技术，依托超过15年的行业经验和稳固的国际地位，ProteoGenix在以下六大服务领域提供独特且定制化的服务：l 抗体工程(人源化、双特异性抗体、ADC、亲和力成熟、分子优化)生物工艺开发(无知识产权限制的稳定细胞系开发、发酵及生物反应器生产优化)单克隆和多克隆抗体开发(杂交瘤法和噬菌体展示)重组蛋白和抗体生产(大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞)基因合成肽合成ProteoGenix的研发实验室始终以创新为导向，通过不断优化技术流程，例如XtenCHOTM，一种瞬时表达细胞系，其生产效率超过了业界标杆ExpiCHO。此外，ProteoGenix还拥有一个包含超过20万种产品的广泛产品目录。产品涵盖抗体、蛋白质、ELISA试剂盒、细胞分离介质、核酸纯化试剂盒等，满足生命科学领域多样化的需求。
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技术资料/正文
蛋白印迹（WB）实验讲解
3869 人阅读发布时间：2021-08-13 10:29
1. 概述：
蛋白印迹实验（Western Blot）。主要通过：
样品制备、
凝胶电泳、
转膜、
封闭、
抗体孵育、
曝光
完成目的蛋白质的定性和半定量检测，从而获得蛋白的表达情况和信息。
2.准备工作
2.1了解目的蛋白的个人信息：标签，一抗、二抗类型。
2.2了解目的蛋白的大小，后面配电泳胶合情合理有依据。
2.3膜，滤纸事先裁剪好。
3.操作流程
3.1样品制备
1）样品蛋白浓度大概控制在0.1-1mg/ml左右。
2）样品过夜混匀离心再上样。
3）Loading buffer加量要有保证。
4）关键时刻别忘阳性对照。
3.2凝胶电泳
1）针对不同大小目的蛋白，制做相匹配的分离胶浓度：目的是当跑胶结束我们的目的蛋白处在胶面的中间部分。
一般来说：15%--35kd左右
12%--55kd左右
10%--70kd左右
8%--100kd左右
2）上样时将长枪头深入到孔径底部慢慢加样。上样量在2ug左右。
3）最好等待maker跑过浓缩胶开始加电压。
TIPS
1.制做胶的时候，不同浓度的分离胶所形成的网筛孔径大小不同，主要是依靠AP引发丙烯酰胺单体聚合 ,从而形成三维网状结构。
2.TEMED只是作为催化剂的作用，催化AP和丙烯酰胺之间的反应，可以酌情适当添加1：1000，减少制胶时间。
3.SDS去蛋白质电荷，使得各种蛋白质带相同负电荷，而只能根据自身大小在电压迁移下穿透网状结构，形成快快慢慢，前前后后的一条条条带。（汗。。这是有多少个条。）
蛋白印迹实验（Western Blot）。主要通过：
样品制备、
凝胶电泳、
转膜、
封闭、
抗体孵育、
曝光
完成目的蛋白质的定性和半定量检测，从而获得蛋白的表达情况和信息。
2.准备工作
2.1了解目的蛋白的个人信息：标签，一抗、二抗类型。
2.2了解目的蛋白的大小，后面配电泳胶合情合理有依据。
2.3膜，滤纸事先裁剪好。
3.操作流程
3.1样品制备
1）样品蛋白浓度大概控制在0.1-1mg/ml左右。
2）样品过夜混匀离心再上样。
3）Loading buffer加量要有保证。
4）关键时刻别忘阳性对照。
3.2凝胶电泳
1）针对不同大小目的蛋白，制做相匹配的分离胶浓度：目的是当跑胶结束我们的目的蛋白处在胶面的中间部分。
一般来说：15%--35kd左右
12%--55kd左右
10%--70kd左右
8%--100kd左右
2）上样时将长枪头深入到孔径底部慢慢加样。上样量在2ug左右。
3）最好等待maker跑过浓缩胶开始加电压。
TIPS
1.制做胶的时候，不同浓度的分离胶所形成的网筛孔径大小不同，主要是依靠AP引发丙烯酰胺单体聚合 ,从而形成三维网状结构。
2.TEMED只是作为催化剂的作用，催化AP和丙烯酰胺之间的反应，可以酌情适当添加1：1000，减少制胶时间。
3.SDS去蛋白质电荷，使得各种蛋白质带相同负电荷，而只能根据自身大小在电压迁移下穿透网状结构，形成快快慢慢，前前后后的一条条条带。（汗。。这是有多少个条。）