新生大鼠皮层来源的小胶质细胞分离和培养

小胶质细胞大约占哺乳动物大脑细胞总数的12%，通过吞噬脑组织中的碎片和病原体来维持脑实质的稳态，在正常的脑生理学中发挥着重要作用。

 

一、解剖新生大鼠脑组织

1. 用温热的生理盐水擦拭P2天的新生鼠；

2. 用70%乙醇冲洗P2新生鼠；

3. 从头部取出整个大脑，放入装有L-15溶液的培养皿中；

4. 移除脑膜，转移皮层到装有L-15溶液的培养皿中。

 

二、制备混合胶质细胞群

1. 清洗所有P2新生鼠的大脑皮层；

2. 把大脑皮层剪成小块；

3. 加入新鲜的DMEMwan全培养基4-5ml，吹打10-15次；

4. 用100um的滤器过滤；

5. 离心2500RCF/5min/4℃。

 

三、种植混合胶质细胞群

1. 一个P2新生鼠的大脑皮层混合细胞群种到一个T-75培养瓶中；

2. 第5天，全量换液，之后每3天全量换液。

 

四、原代小胶质细胞的分离和培养

1. 2-3周，当混合的细胞群长满T-75培养瓶底；

2. 在37℃以150rps的速度摇动T-75培养瓶2小时;

3. 用移液管从所有T-75培养瓶中收集培养基，不要破坏培养瓶表面的星形胶质细胞层；

4. 离心2500RCF/5min/4℃；

5. 吸取上清液，将沉淀重悬于1 ml小胶质细胞培养基中；

6. 计数；

7. 种植小胶质细胞。

8. 在培养箱中培养。

 

五、代表性结果