百萤课堂之活性氧Cell Meter线粒体羟基自由基检测试剂盒适用仪器

一、百萤活性氧Cell Meter线粒体羟基自由基检测试剂盒简介

细胞内羟基自由基的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响至关重要。羟基（HO·）是与其他分子高度反应的活性氧（ROS）之一，以实现稳定性。通常，羟基被认为是氧化代谢的有害副产物，其可以在生命系统中引起分子损伤。它显示平均寿命为10-9秒，可以与几乎所有生物分子如核DNA，线粒体DNA，蛋白质和膜脂质发生反应。  MitoROS OH580是活细胞渗透探针，可以快速和选择性地靶向活细胞中的羟基自由基。当它与OH·反应时产生红色荧光，并且可以在Ex / Em = 540 / 590nm处容易地读取。 Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒提供灵敏的荧光探针，可在孵育1小时后检测活细胞中的OH·。

图1.使用MitoROS™ OH580对HeLa细胞中的羟基自由基进行荧光成像。将HeLa细胞在37℃下与MitoROS™ OH580工作溶液孵育1小时，然后用HHBS清洗一次。Fenton反应：然后将细胞在37℃下用1X HBSS缓冲液中加入10 µM CuCl2和100 µM H2O2处理1小时。对照组：HeLa细胞在1X HBSS缓冲液中不进行处理。用HHBS清洗3次后，用TRITC滤光片（红色）荧光显微镜测量HeLa细胞。用Hoechst 33342（17530，蓝色）对细胞核进行染色。

图2.使用MitoROS™OH580 (Cat#16055)检测RAW 264.7细胞中的细胞内羟基自由基。细胞用MitoROS™OH580工作液在37℃下孵育1小时，然后用HHBS洗涤一次。然后将细胞在37℃的生长培养基中不加或加PMA (phorbol 12-肉豆酸酯13-乙酸酯，10 ~ 500 ng/mL)孵育4小时。用HHBS洗涤3次后，使用带TRITC滤光片的荧光显微镜检测HeLa细胞。

图3. 抗氧化剂NAC部分且显著地逆转了H2O2介导的FLS1细胞ERK1/2磷酸化的增加。（A）细胞在（Aa）无H2O2（500 μM）或（Ab）有H2O2（500 μM）条件下培养24小时，然后用荧光显微镜观察细胞内的OH∙产生情况。使用Cell Meter™线粒体羟基自由基（OH∙）检测试剂盒在荧光显微镜下检测FLS1细胞中的羟基自由基。

二、百萤活性氧Cell Meter线粒体羟基自由基检测试剂盒适用仪器

荧光酶标仪

荧光显微镜