9、碳二亚酰胺-戊二醛（ECD-G）液
试剂：

0.05mol/L PB	500ml
0.01mol/L PBS	500ml
Tris	14g
浓HCl	少许
ECD	10g
25%戊二醛	3.5ml

 
 
配制方法：先以约500ml的PB与相同体积的PBS混合，加入Tris（使其终浓度为1.4%）溶解，以浓HCl调pH至7.0，再将事先称取好的ECD和戊二醛加入混合液，振摇后计时，用pH计检测，约2~3min时，pH降至6.6，再以1N的NaOH在4min内调pH至7.0，此时，将该混合固定剂加入盛有细胞（经PBS漂洗过）的器皿中，在23℃固定7min后，以PBS洗去固定剂，即可进一步处理。
ECD即乙基-二甲基氨基丙基碳亚胺盐酸盐[1-ethyl-3（3-dimethyl-aminoprpyl）-carboi-imide hydrochloride]，简称乙基-CDI，常用于多肽类激素的固定，对酶等蛋白质的固定也有良好效果。ECD单独应用时，边缘固定效应重，但与戊二醛、Tris及PB联合应用，效果明显，细胞质仍可渗透，利用细胞中抗原的定位，超微结构保存较好。目前认为是一种用于培养细胞电镜水平免疫细胞化学研究的很好的固定剂。
10、四氧化锇（锇酸Osmic Acid， OsO4）
配制：将洗净装有OsO4的安瓿中加热后，迅速投入装有溶剂的棕色瓶中，使安瓿遇冷自破。也可用钻石刀在安瓿上划痕，洗净后再放入瓶中，盖好瓶塞，用力撞击安瓿，待其破后加溶剂稀释。为保证充分溶解，应在用前几天配制。
（1）2% OsO4水溶解：取OsO41g溶于重蒸水中。此液常作为储备液，于冰箱中密封保存。
（2）1% OsO4-PB：
试剂：
A、2.26% NaH2PO4•2H2O 4.15ml
B、2.52% Na2HPO4•2H2O 8.5ml
C、5.4% 葡萄糖 5ml
D、OsO4 0.5g
配制方法：先分别配好A、B、C三种液体，取A液41.5ml与B液8.5ml混合，将pH调至7.3~7.4，取A-B混合液45ml再与5ml C液混合即为0.12mol/L PBG。
（3）1% OsO4/0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液（pH7.2~7.4）：
试剂：
2% OsO4水溶液 10ml
0.2mol/L二甲胂酸钠缓冲液（pH7.2~7.4） 10ml
配制方法：取2%OsO4储备液10ml与等量0.2mol/L、pH7.2~7.4的二甲胂酸钠缓冲液充分混合即可。
OsO4是电镜研究所必需的试剂，常用于后固定。尽管OsO4主要为脂类固定剂，但也可与肽类及蛋白质起作用，形成肽-蛋白质或肽-脂交联。过氧化物酶的反应产物经OsO4处理后，电子密度增高，适于电镜研究。但由于OsO4的反应产物对光及电子有较明显的吸收能力，因此在免疫细胞化学染色前常需去除，去锇在光镜水平常用1%的高锰酸钾，在电镜水平则常用H2O2来处理。
以上介绍了目前免疫细胞化学中常用的一些固定剂。关于固定剂种类还很多，如70%~90%的酒精、丙酮、醋酸酒精（含0.1%~1%醋酸的70%~90%的酒精等），这些溶液都能促使蛋白质凝固。它们初只是光学显微镜通用的固定剂，但在免疫细胞化学上用其它方法不成功时，也可试用。总之，掌握一个原则，免疫细胞化学中，含重金属的固定剂禁用（但Zenker-Formalin可进行短时的固定）。目前多数认为，对生物标本较好的固定措施是：用4℃的Karnovsky’s液灌注固定10~30min后，接着在pH7.3、0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液中漂洗过液，这种短时冷固定处理，有助于超微结构和许多肽类抗原的保存。对其它较难保存的抗原可尝试PFG、PLP及Zamboni's液等混合固定剂。