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技术资料/正文
百萤 Annexin V,TRITC标记------研究细胞凋亡的工具
672 人阅读发布时间：2023-05-18 08:39
- 百萤 Annexin V,TRITC标记参数
E m (nm) 570
分 子 量 ~36000
溶 剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存，避光防潮
规 格 100次分析
有效成分 98%
类 型 蛋白质
- 百萤 Annexin V,TRITC标记概述
- 实验操作步骤
(1.1)制备膜联蛋白V缀合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl 2，pH 7.4。
(1.2)用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。
(1.3)离心细胞，得到1-5×10 5个细胞/管。
(1.4)将细胞重悬于200μLAnnexin V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。
(1.5)在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。
可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。
(1.6)余ncubate在室温下进行30至60分钟，避光。
(1.7)在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μLAnnexin V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。
(1.8)使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。
(2)使用流式细胞仪分析：
通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。
注意：粘附细胞上的膜联蛋白V 结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。和van Engelend等人（见参考文献1和2）。
(3)使用荧光显微镜分析：
(3.1)移液器从步骤(1.6)，将细胞悬浮液冲洗1-2次用甲nnexin V-结合测定缓冲液（来自步骤1.1） ，然后与A重悬细胞 nnexin V-结合测定缓冲液（来自步骤1.1） 。将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。
注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白V缀合物（步骤1.6）孵育后，用Nnexin V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将A nnexin V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。
(3.2)在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。