乳酸含量(lactic acid,LA)试剂盒说明书-分光光度法
320 人阅读发布时间:2021-11-25 09:13
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量
代谢密切相关,乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使NAD+还原生成NADH 和H+,H+传递给PMS
生成的 PMSH2 还原 INT 生成红色物质,在 530nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 支,-20℃避光保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水充分溶解。试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 15mL 蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1 支,4℃避光保存。标准品:液体 1mL×1 支,4℃保存。
显色液:临用前根据用量按照提取液(V):试剂三(V):试剂四(V):试剂五(m)=1(mL): 0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,试剂盒中带有 5 个棕色空瓶)