深挖友康NK无血清培养基——细胞功能检测第三弹：LDH法检测NK细胞杀伤能力

​上期文章我们展示了使用友康纯因子无血清培养基培养出的NK细胞的脱颗粒能力，NK细胞脱颗粒能力可以用CD107a的表达来检测。实验结果表明，在不同的效靶比下，CD107a均能够正常表达。随着NK与K562细胞孵育时间的延长，CD107a的表达量有明显上调。

样本一：孵育2h

样本二：孵育4h

本期我们通过LDH法检测NK细胞的杀伤能力。细胞的胞浆内含有LDH，正常情况下LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD+还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞类化合物，在酶标仪上用490nm比色测定。其反应原理如下：

 

检测步骤

1. 靶细胞K562的准备：实验前24h将靶细胞进行传代培养，应用前用无血清培养基清洗1次，用无血清培养基调整细胞密度并接种于孔板。

2. 效应细胞的准备：应用前用无血清培养基清洗1次，用无血清培养基调整细胞密度。

3. NK细胞活性检测：取靶细胞和效应细胞按不同效靶比进行接种，加入U型96孔培养板中，于37度，5%CO2培养箱中孵育4小时。随后将细胞在孔板中400g离心5min。LDH释放剂的添加为原体积的10%，加入释放剂后反复吹打细胞。

4. 分别取各孔上清液120ul，加入到新的96孔平底板种，每孔加入LDH检测工作液。

5. 混匀，室温25℃避光孵育30min。然后在490nm处测定吸光度。可使用600nm或大于600nm的任意波长作为参考波长进行双波长测定。

 

NK细胞活性（%）=[（反应孔OD-自然释放孔OD）/（最大释放孔OD-自然释放孔OD)]*100%

 

检测结果

 

检测结论

经LDH法检测可知，友康纯因子无血清培养基培养出的NK细胞对K562细胞有正常的杀伤能力。