N家目录 | 基于qPCR法检测外源基因拷贝数

1.背景介绍

基因拷贝数是指某一种基因或某一段特定的DNA序列在单倍体基因组中出现的数目。基因拷贝数检测对于理解基因的表达、功能以及生物的遗传特性具有重要意义。它可以帮助我们了解基因在不同条件下的表达水平，以及基因变异对生物体的影响。

《中国药典》2020版3部中《生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制》明确指出重组工程菌生产用菌种主种子批检定需进行外源基因拷贝数检定，ICH Q5B要求采用限制性内切酶图谱或其他适宜的技术分析表达构建体的拷贝数、插入或缺失情况以及整合位点的数目；对染色体外的表达系统（如大肠杆菌），应测定保留有表达构建体的宿主细胞所占的百分数。因此，外源基因拷贝数检测对产品的质量控制及安全性具有重要意义。

——《生物制品生产鉴定用菌毒种管理及质量控制》

目前检测主要方法有：多重链接探针扩增技术、多重可扩增探针杂交技术、原位免疫荧光、Southern印迹技术、芯片比较基因组杂交技术、数字PCR法（ddPCR）、实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）等方法。

但是这些方法各有优缺点，例如基于聚合酶链反应的方法操作简便，但分辨率较低；基于杂交技术的方法操作复杂，但分辨率较高；数字PCR法灵敏度高，但设备成本较高等等。

其中，实时荧光定量PCR方法由于特异性好和可靠性强，可对基因片段进行绝对定量，操作相对简单等特点被广泛采用。

2.NovoBio平台

NovoBio分子生化平台基于这一方法开发了基因拷贝数检测体系，可快速检测各种样品中目的基因的拷贝数。我们拥有先进的技术平台，严格的质量控制体系，经验丰富的专业团队，一站式服务+产品的解决方案，助力您加快药物研发进程。

3.服务流程（仅需1~2周）

4.送样要求

（1）细胞：≥1E6；

（2）DNA：0.1 mg/mL，200 μL以上。

5.案例展示

本案例以CHO细胞抗体基因作为待测样本，采用荧光染料法分别检测分析了重链和轻链不同代次的基因组拷贝数。