N家干货 | 如何选择合适的细胞杀伤功能评价实验？

1.背景介绍

近年来，免疫细胞疗法作为一种新兴的治疗手段，在肿瘤治疗领域展现出了巨大的潜力。截至2024年，全球生物制药行业中有近2000种细胞治疗类管线处于临床前或临床阶段[1]，其中，免疫细胞的杀伤活性是评价免疫细胞疗法治疗效果的一个重要因素。

免疫细胞肿瘤杀伤活性的体外评价一般会涉及免疫细胞和肿瘤细胞两种细胞，基于ATP法可以检测所有的活细胞，不好指示被杀伤的是靶细胞还是效应细胞。因此不宜采用ATP法的检测手段，常用的方法有荧光素酶报告基因法检测、LDH释放的检测、放射性同位素51Cr释放检测和EuTDA细胞毒法，下面我们来盘点这四种检测方法的优劣势，以供大家进行选择。

2.荧光素酶报告基因法

将荧光素酶报告基因导入靶细胞，活的靶细胞会表达荧光素酶，加入荧光素酶报告基因检测试剂 (NovoBio货号KT6471) 后释放出光信号，活的靶细胞数量与释放出的光信号成正比，从而可以评判免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。

 

图1. 萤火虫荧光素酶发光原理

✦ 优点：

1. 方法稳定，灵敏度高，背景值低。

2. 同时测定对多种靶细胞的杀伤作用。用不同报告基因转染的细胞系可同时测定杀伤效应, 结果互不干扰。

3. 机制研究。用不同的基因调控元件控制报告基因的表达，可进一步研究作用机制。

✦ 不足：

周期相对较长：建立报告基因稳定转染细胞系实验周期较长。

3.LDH释放的检测

正常情况下，乳酸脱氢酶 (LDH) 存在于活细胞胞浆内，不能透过细胞膜，当细胞受到损伤时，LDH可以透过细胞膜释放到培养基中。释放出来的LDH和被杀伤的靶细胞成正比，利用酶标仪读取OD值，即可评估杀伤细胞的活性。（NovoBio 货号KT6450）

✦ 优点：

1. 方法简单，可测的通量比较高。

2. 成本相对比较低。

3. 使用优于传统比色法的荧光法，灵敏度更高。

✦ 不足：

如果效应细胞状态不好，会出现数据重复性不好、结果不稳定的情况。效应细胞状态与个体间的差异及冻存复苏等均有关。

4.放射性同位素51Cr释放法

用放射性51Cr标记靶细胞，在效应细胞杀伤靶细胞的过程中，靶细胞由于细胞膜失去完整性，向培养基中释放51Cr，培养基中的51Cr与被杀死的靶细胞数量成正比，从而评估免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。

✦ 优点：

测量细胞介导的细胞毒性的金标准。

✦ 不足：

1. 51Cr放射性对研究者的健康状况有一定的影响。

2. 对昂贵设备和专业人员的需求能力没有得到相对普及。

5.EuTDA细胞毒法

EuTDA的检测原理与51Cr测定法相似，乙酰酯化的BATDA能迅速进入靶细胞，并在水解作用下形成TDA留在靶细胞内，在细胞受到损伤后释放到胞外的TDA与荧光探针Eu3+ 形成Eu-TDA 复合物，通过检测Eu-TDA 的时间分辨荧光信号，来评价免疫细胞对肿瘤细胞的特异杀伤活性。

✦ 优点：

灵敏度高、安全性好，对于非特异性死亡的干扰较小。

✦ 不足：

1. 成本较高。

2. 操作复杂，需要专业人员操作，增加实验难度。

6.NovoBio荧光素酶报告基因产品

✦ 产品描述

NovoBio萤光素酶报告基因检测试剂盒旨在准确、灵敏、高效地测定萤光素酶活性，为了满足您不同的发光底物，半衰期和发光强度的需求，NovoBio推出了3种检测系统（萤火虫，海肾，新型Novo）共6款产品加速您的药物研发进程。

✦ 产品特点

（1）通过重复性，稳定性，线性，精密度，耐用性的数据验证，可实现国产替代。

（2）种类多品类全，可满足不足半衰期和发光强度的需求。

（3）发光信号值更高，背景信号值更低，检测窗口值更宽，稳定性更好。

（4）无异味，对操作者友好。

✦ 数据展示

✦ 产品订购

产品名称	货号	规格
One-Light （2G）萤火虫荧光素酶报告基因	KT6471-100	100T/盒
One-Light （2G）萤火虫荧光素酶报告基因	KT6471-1000	1000 T/盒
Bright-Light萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6472-100	100T/盒
Bright-Light萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6472-1000	1000T/盒
Steady-Light萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6470-100	100 T/盒
Steady-Light萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6470-1000	1000 T/盒
Bio-Light萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6473-100	100T/盒
Bio-Light萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6473-1000	1000T/盒
Reni-Light海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6039-100	100T/盒
Reni-Light海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6039-1000	1000T/盒
Novo-Light荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6032-100	100 T/盒
Novo-Light荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6032-1000	1000 T/盒
Novo-Light荧光素酶报告基因检测试剂盒	KT6032-100*10	100 T/盒*10
Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）	KT6449	500 T/盒
Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）（2G）	KT6464	500 T/盒
乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性荧光检测试剂盒	KT6450	200-800 T/盒
乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒	KT6451	100 T/盒