文献解读 | 一款靶向B7H3（CD276）位点糖基化的功能性抗体，有望启发肿瘤免疫治疗

1.文献解读

2025年4月发布在Nat. Commun上的一篇文章指出：N糖基化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰，发生在Asn-X-Ser/Thr（X≠Pro）的NXT基序上，对蛋白质折叠、降解、定位、运输及相互作用等有重要影响。文中研究的 B7H3 是高度N糖基化的膜蛋白，在多种实体瘤高表达，其糖基化与肿瘤免疫逃逸相关，但关键糖基化位点不明。

2. 关于N糖基化位点的确定

人类B7H3含四对N糖基化位点（N91/N309、N104/N322、N189/N407、N215/N433），小鼠B7H3含四个N糖基化位点（N91、N104、N189、N215）。突变N91/309和N104/322位点，B7H3细胞表面定位显著降低，类似全糖基化缺陷突变体（B7H3-8NQ），恢复单个位点可部分恢复膜表达。如在图1a、1b、1c、1d中，通过流式细胞术检测不同突变体B7H3在细胞表面的表达情况，直观呈现出N91/309和N104/322位点突变对B7H3细胞表面定位的影响。

图1. B7H3在N91/N309和N104/N322位点的N-糖基化是B7H3蛋白细胞表面定位和稳定的主要因素

3.糖基化影响B7H3的稳定性

N91/309和N104/322位点糖基化缺失，B7H3通过内质网相关蛋白降解（ERAD）途径被泛素-蛋白酶体系统降解，降解速率加快、K48泛素化水平升高。图2a、b、c、d中，用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞，检测糖基化缺陷突变体B7H3蛋白水平变化；通过免疫沉淀结合蛋白质印迹检测泛素化水平，证实了这一降解途径。

图2. B7H3在N91/N309和N104/N322处的异常N-糖基化诱导其ER相关降解

4.糖基化调控B7H3的胞内运输

N91/309和N104/322位点糖基化缺失，阻断B7H3从内质网（ER）到高尔基体的转运，使其在ER积累。免疫荧光显示，糖基化缺陷突变体（N91/104/309/322Q和8NQ）与ER标记物（KDEL）共定位，与ERGIC和高尔基体标记物（TGN38）共定位减少，在图2e、2f中清晰展示了这种共定位情况。

图3. B7H3在N91/N309和N104/N322位点的异常糖基化阻断了其内质网向高尔基体的易位

5.糖基化影响B7H3的免疫抑制功能

N91/309和N104/322位点的N糖基化对B7H3抑制T细胞增殖和活化至关重要，缺失会削弱其免疫逃逸能力。图4a、4b、4c、4d、4e、4f中，通过将表达野生型和糖基化缺陷型B7H3的细胞与CD4⁺/CD8⁺ T细胞共培养，检测T细胞增殖和细胞因子分泌，证明了这一点。

图4. B7H3在N91/302和N104/322位点的N-糖基化在体外调节其对T细胞的抑制功能

6.靶向糖基化B7H3的抗体开发

鉴于N91/302和N104/322糖基化位点的糖基化对B7H3的定位和功能的重要性，科学家们通过使用具有胞外结构域的重组人4Ig-B7H3-His融合蛋白（Met1-Thr461）对兔进行免疫接种，制备了优先识别糖基化B7H3的单克隆抗体。单克隆抗体Ab-82优先靶向N91/309和N104/322糖基化的B7H3，可诱导B7H3内吞和降解，激活细胞毒性T淋巴细胞（CTL）增强抗肿瘤免疫。

图5. 生成糖基化B7H3抗体的工作流程图

7.结论

该研究首次明确了N91/309和N104/322位点的N糖基化修饰是B7H3发挥细胞表面定位和免疫抑制功能的关键。这一发现为肿瘤免疫治疗提供了新的思路，即靶向糖基化的B7H3可能是一种有效的治疗策略，为后续相关药物的开发奠定了基础。