文摘:

背景和目的

P2X4受体是治疗慢性疼痛和心血管疾病的新兴治疗靶点。狗是公认的人类疾病的自然模型，但缺乏关于狗的P2X4的信息。为了帮助P2X4靶向疗法的开发和验证，本研究旨在对犬和人的P2X4进行特征和比较。

实验方法

从101只随机选取的狗的全血样本中提取基因组DNA，并对P2RX4基因进行测序，以识别潜在的错义变异。用祖母绿荧光蛋白标记的重组犬和人P2X4在1321N1和HEK293细胞中表达，并用免疫印迹和共聚焦显微镜进行分析。在1321N1和HEK293细胞中，P2X4的药理学特征是通过核苷酸诱导的Fura‐2 AM测量细胞内Ca2+反应和已知的P2X4拮抗剂。通过自动膜片钳检测HEK293细胞中P2X4介导的内向电流。

关键结果

在所有犬类样本中未发现P2RX4错义变异。犬和人的P2X4主要定位于溶酶体室。ATP被鉴定为犬P2X4的主要激动剂，其对人P2X4的疗效和效价几乎相同。2 '(3 ')‐O‐(4‐苯甲酰)苯甲酰ATP (BzATP)，而不是ADP，被鉴定为犬P2X4的部分激动剂，与人类同源物相比，其效力降低。五种拮抗剂抑制犬P2X4，其中BX430对犬P2X4的敏感性和效力降低。

结论和影响

P2X4在犬系中高度保守，与人类P2X4表达模式和药理学特征相似，为验证和使用设计用于犬和人类P2X4相关疾病发病和管理的治疗方法提供了支持。